Sovaĝa Taq DNA-polimerazo
Taq DNA Polymerase estas termostabila DNA-polimerazo de Thermus aquaticus YT-1, kiu posedas 5′→3′ polimerazan agadon kaj 5′ klapan endonukleazan agadon.
Komponentoj
| Komponanto | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Taq DNA-polimerazo (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Kondiĉo de Stokado
Transportado sub 0 °C kaj stokita je -25 °C ~ -15 °C.
Unueca Difino
Unu unuo estas difinita kiel la kvanto de enzimo kiu korpigas 15 nmol da dNTP en acidan nesolveblan materialon en 30 minutoj je 75 °C.
Kontrolo de kvalito
1.Testo pri Proteina Pureco (SDS-PAGE):La pureco de Taq DNA-polimerazo estis ≥95% determinita per SDS-PAGE-analizo.
2.Endonukleaza Aktiveco:Minimumo de 5 U da Taq DNA-polimerazo kun 1 μg λDNA dum 16 horoj je 37 ℃ rezultigas neniun konstateblan degeneron kiel determinite.
3.Eksonuclease-Agado:Minimumo de 5 U da Taq DNA-polimerazo kun 1 μg λ -Hind Ⅲ digestas DNA dum 16 horoj je 37 ℃ rezultigas neniun konstateblan degeneron kiel determinite.
4.Nickase-Agado:Minimumo de 5 U da Taq DNA-polimerazo kun 1 μg pBR322 DNA dum 16 horoj je 37 °C rezultigas neniun konstateblan degeneron kiel determinite.
5.RNase-Agado:Minimumo de 5 U da Taq DNA-polimerazo kun 1.6 μg MS2 RNA dum 16 horoj je 37 °C rezultigas neniun konstateblan degeneron kiel determinite.
6.E. coliDNA:5 U da Taq DNA-polimerazo estas ekzamenitaj por la ĉeesto de E. coli genomic DNA uzante TaqMan qPCR kun enkondukoj specifa por la E. coli 16S rRNA-lokuso.La E. coli genoma DNA-poluado estas ≤1 Kopio.
7.PCR-Pliforto (5.0 kb Lambda DNA)- 50 µL reago enhavanta 5 ng Lambda DNA kun 5 unuoj de Taq DNA Polymerase por 25 cikloj de PCR-amplifiko rezultigas la atendatan 5.0 kb-produkton.
Reago-Agordo
| Komponentoj | Volumo |
| Ŝablono DNAa | nedeviga |
| 10 μM Antaŭen Enkonduko | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Miksaĵo (10 mM ĉiu) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA-polimerazob | 0,25 μL |
| Sennukleaza akvo | Ĝis 50 μL |
Notoj:
1) La optimuma reagkoncentriĝo de malsamaj ŝablonoj estas malsama.La sekva tabelo montras la rekomenditan ŝablonon-uzon de 50 µL-reagsistemo.
| DNA | Kvanto |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmido aŭ Viral | 1 pg-1 ng |
2) La optimuma koncentriĝo de Taq DNA Polymerase povas varii de 0.25 µL ~ 1 µL en specialecaj aplikoj.
ReagoProgramo
| Paŝo | Temperaturo(°C) | Tempo | Cikloj |
| Komenca denaturadoa | 95 ℃ | 5 minutoj | - |
| Denaturado | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cikloj |
| Kolektib | 60 ℃ | 15 s | |
| Etendo | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Fina Etendo | 72 ℃ | 5 minutoj | - |
Notoj:
1) La komenca denatura kondiĉo taŭgas por la plej multaj plifortigaj reagoj kaj povas esti modifita laŭ la komplekseco de ŝablonstrukturo.Se la ŝablonstrukturo estas kompleksa, la antaŭ-malnatura tempo povas esti plilongigita al 5-10-minutoj por plibonigi la komencan denaturan efikon.
2) La kalcia temperaturo devas esti ĝustigita laŭ la Tm-valoro de la enkonduko, kiu ĝenerale estas agordita al 3~5 ℃ pli malalta ol la Tm-valoro de la enkonduko;Por kompleksaj ŝablonoj, necesas alĝustigi kalsontemperaturon kaj plilongigi etendtempon por atingi efikan plifortigon.
