Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kato-N-ro: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG estas specialeca reakciilo dizajnita por Real Time PCR kvalitaj kaj kvantaj reagoj uzante enket-bazitan detekto, evoluigita specife por liofiligaj procezoj.Ĝi enhavas novan varm-komencan enzimon Hotstart Taq plus (DG), kiu havas sian Taq-enzimaktivecon sigelita ĉe ĉambra temperaturo, efike malhelpante nespecifan plifortigon kaŭzitan de enkonduka nespecifa kalciado aŭ enkonduka dimerformado sub malaltaj temperaturoj, tiel plibonigante. la specifeco de la plifortiga reago.Ĉi tiu reakciilo uzas optimumigitan qPCR-specifan bufron kaj UNG/dUTP-kontraŭpoluan sistemon por atingi rapidan varman ekfunkciigon, multe plibonigante la efikecon kaj sentemon de qPCR-reagoj.Ĝi povas akiri bonajn normajn kurbojn en larĝa gamo de kvantaj areoj kaj precize plenumi kvantadon, efike malhelpante falsan pozitivan plifortigon kaŭzitan de postrestantaj PCR-produktoj aŭ aerosolpoluado.Tiu reakciilo estas kongrua kun la plej multaj fluoreskaj kvantaj PCR-instrumentoj de produktantoj kiel ekzemple Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad kaj Roche ktp., kaj elmontras bonan stabilecon en liofiligita formo.
Reaktiva komponado
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+senpaga) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lioprotektanto (laŭvola)
Kondiĉoj de Stokado
Longtempa stokado ĉe -20℃;povas esti konservita je 4℃ dum ĝis 3 monatoj.Miksu bone antaŭ uzo kajevitu ripetan frostiĝon kaj degelon.
Protokolo pri biciklado
| Proceduro | Temp. | Tempo | Ciklo |
| Digestado | 50℃ | 2 min | 1 |
| Aktivigo de polimerazo | 95℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Denature | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Kolcigado kaj Etendo | 56~64℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR Likva Reago Sytigo Preparado
|
Komponado |
25µL Volumo |
50µL Volumo |
Fina Koncentriĝo |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+senpaga) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4 × lioprotektanto1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Ŝablono DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Al 25 µL | Al 50 µL | —— |
1. Fina koncentriĝo de 0.2μM por enkondukoj kutime donas bonajn rezultojn;kiam la agado de reago estas malbona, ĝustigu primeran koncentriĝon en la intervalo de 0.2-1μM laŭbezone.Sonda koncentriĝo estas tipe optimumigita ene de la intervalo de 0.1-0.3μM tra gradienteksperimentoj por trovi optimumajn kombinaĵojn.
2. La kopinombro de celgenoj enhavitaj en malsamaj specoj de ŝablonoj varias;se necese, gradienta diluo povas esti farita por determini la optimuman ŝablonaldonkvanton.
3. Ĉi tiu sistemo povas esti liofiligita;kiam klientoj uzas ĉi tiun sistemon sen postfrostigigaj postuloj, 4 × lioprotektanto povas esti selekteme aldonita; se estas bezonataj frostigsekigitaj produktoj, dum likvaj reakciiloj enscenigas produktan efikecon, ĝi devas aldoni 4 × lioprotektilon por certigi konsistencon kun la liofiligitaj sistemaj komponantoj. kaj efikoj.
Kiam la sistemo estas uzatad por frostigi, prepari la sistemo as jenaj:
| Komponado | 25µL Reagsistemo |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+senpaga) (DG) | 5 µL |
| 250mM MgCl2 | 0,45 µL |
| 4 × lioprotektanto | 6,25 µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1 µL |
| ddH2O | Al 18~20µL |
* Se necesas aliaj sistemoj por frostigado, bonvolu konsulti aparte.
Liofiligo Procedoss
| Proceduro | Temp. | Tempo | Kondiĉo | Premo |
| Antaŭfrostigo | 4℃ | 30 min | Tenu |
1 atm |
| -50℃ | 60 min | Malvarmigo | ||
| -50℃ | 180 min | Tenu | ||
| Primara Sekigado | -30℃ | 60 min | Hejtado |
Finfina Vakuo |
| -30℃ | 70 min | Tenu | ||
| Sekundara Sekigado | 25℃ | 60 min | Hejtado |
Finfina Vakuo |
| 25℃ | 300 min | Tenu |
2. La supra liofiligo estas nur por referenco.Malsamaj produktaj specoj kaj malsamaj frostigiloj havas malsamajn parametrojn, do ĝustigoj povas esti faritaj laŭ reala.kondiĉoj dum uzo.
3. Malsamaj liofiligaj procezoj povas esti taŭgaj por malsamaj aroj de liofiligitajproduktoj, do sufiĉa testa validado devas esti farita kiam uzata por grandskala produktado.
Instrukcioj por uzi liofilizond pulvoro
1. Mallonge centrifugu la liofiligitan pulvoron;
2. Aldonu nuklean acidan ŝablonon al la liofiligita pulvoro kaj aldonu akvon ĝis 25µL;
3. Miksu bone per centrifugado kaj kuru sur maŝino.
Kontrolo de kvalito:
1. Funkcia testado: sentemo, specifeco, reproduktebleco de qPCR.
2. Neniu eksogena nukleaza agado, neniu eksogena endo/eksogena poluado.
Teknikaj Informoj:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG uzas novan varmegan enzimon, kiu ebligas rapidan varman ekfunkciigon ene de 1 ~ 5 minutoj;per speciala bufroformulo ĝi taŭgas por plurfojaj fluoreskaj kvantaj PCR-reagoj.
2. Ĝi havas pli altan specifecon, kiu signife plibonigas la sentivecon de fluoreskeco kvanta PCR-limo-detekto, farante amplifigajn kurbojn normaligon, fluoreskecvaloro akiri evidentan plibonigon ĉe malalta koncentriĝo ŝablonoj, taŭga kiel alta sentiveco fluoreskeco kvanta PCR detekto reagentoj.
3. Por enkondukoj kun pli malalta kalcia temperaturo aŭ pli longaj ol 200bp fragmentoj, 3-paŝa metodo estas rekomendita.
4. La utiliga efikeco de dUTP kaj sentemo al UNG-enzimo diferencas por malsamaj celaj genoj, tiel se uzado de UNG-sistemo kondukas al malkresko de detekta sentemo, la reagsistemo devas esti ĝustigita kaj optimumigita.Se necesas teknika subteno, bonvolu kontakti nian kompanion.
5. Uzu dediĉitajn areojn kaj pipetojn antaŭ kaj post plifortigo, portu gantojn dum operacio kaj anstataŭigu ilin ofte;ne malfermu la reagtubon post PCR-kompletiĝo por minimumigi poluadon de specimenoj per PCR-produktoj.
