Proteinazo K NGS (pulvoro)
Kato-N-ro: HC4507A
NGS Protease K estas stabila serina proteazo kun alta enzima aktiveco kaj larĝa substrata specifeco. La enzimo prefere malkomponas esterajn ligojn kaj peptidajn ligojn najbaraj al la C-finaĵo de hidrofobaj aminoacidoj, sulfur-enhavantaj aminoacidoj kaj aromaj aminoacidoj.Do, ĝi estas ofte uzata por degradi proteinojn en mallongajn peptidojn.NGS Protease K estas tipa serinproteazo kun la Asp39-Lia69-Ser224kataliza triado kiu estas unika al serinproteazoj, kaj la kataliza centro estas ĉirkaŭita de stupo Ca2+ligejoj por stabiligo, konservante altan enzimaktivecon sub pli larĝa gamo de kondiĉoj.
Specifo
| Aspekto | Blanka ĝis blankeca amorfa pulvoro, liofiligita |
| Specifa agado | ≥40U/mg solida |
| DNase | Neniu detektita |
| RNazo | Neniu detektita |
| Bioŝarĝo | ≤50CFU/g solida |
| Restaĵo de nuklea acido | <5pg/mg solida |
Propraĵoj
| Fonto | Tritirachium albumo |
| EC-numero | 3.4.21.64(Rekombinaĵo de Tritirachium-albumo) |
| Molekula pezo | 29kDa (SDS-PAĜO) |
| Izoelektra punkto | 7.81 Fig.1 |
| Optimuma pH | 7.0-12.0 (Ĉiuj plenumas altan agadon) Fig.2 |
| Optimuma temperaturo | 65℃ Fig.3 |
| pH Stabileco | pH 4,5-12,5 (25℃,16h) Fig.4 |
| Termika stabileco | Sub 50℃ (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| Stoka stabileco | Stokita ĉe 25℃ dum 12 monatoj Fig.6 |
| Aktivigantoj | SDS, ureo |
| Inhibidores | diisopropil fluorofosfato;benzilsulfonila fluorido |
Kondiĉoj de Stokado
Konservu la liofilizitan pulvoron ĉe -25 ~ -15 ℃ dum longa tempo for de lumo;Post dissolvo, alikvoto en taŭgan volumon por mallongdaŭra konservado je 2-8 ℃ for de lumo aŭ longdaŭra stokado je -25 ~ -15 ℃ for de lumo.
Antaŭzorgoj
Portu protektajn gantojn kaj okulvitrojn kiam vi uzas aŭ pezas, kaj konservu bone ventolitajn post uzo.Ĉi tiu produkto povas kaŭzi haŭtan alergian reagon kaj gravan okulan koleron.Se enspirata, ĝi povas kaŭzi alergiajn aŭ astmajn simptomojn aŭ dispneon.Povas kaŭzi spiran koleron.
Unuodifino
Unu unuo de NGS Protease K estas difinita kiel la kvanto de enzimo postulata por hidrolizi kazeinon en 1 μmol L-tirozinon sub normaj determinkondiĉoj.
Preparado de reakciiloj
| Reakciilo | Fabrikisto | Katalogo |
| Kazeina teknikael bova lakto | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4·2H2O | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Trikloroaceta acido | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| Natria acetato | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| Aceta acido | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| Natria karbonato | Sinopharm KemiaReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Folino-fenolo | Sangon Biotech (Ŝanhajo)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tirozino | Sigma | 93829 |
Reakciilo I:
Substrato: 1% Kazeino el solvaĵo de bova lakto: solvu 1g de kazeino de bova lakto en 50ml da 0,1M natria fosfata solvaĵo, pH 8,0, varmigu en akvobanon je 65-70 °C dum 15 minutoj, miksu kaj solvu, malvarmigu per akvo, alĝustigita per natria hidroksido al pH 8.0, kaj diluu al 100 ml.
Reakciilo II:
TCA-solvo: 0,1M trikloroaceta acido, 0,2M natria acetato kaj 0,3M aceta acido (pezu 1,64g trikloroaceta acido + 1,64g natria acetato + 1,724mL aceta acido sinsekve, aldonu 50mL dejonigitan akvon, ĝustigu pH-on kaj ĝustigu per 4-HC03 al pH. 100 ml).
Reakciilo III:
0.4m natria karbonato solvo (pezu 4.24g anhidra natria karbonato kaj solvu en 100mL akvo)
Reakciilo IV:
Folin-fenola reakciilo: diluu 5 fojojn kun dejonigita akvo.
Reakciilo V:
Enzima diluilo: 0,1 M natria fosfata solvo, pH 8,0.
Reakciilo VI:
L-tirozina norma solvo: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml L-tirozino solvita kun 0,2M HCl.
Proceduro
1. Enŝaltu la UV-Vis-spektrofotometron kaj elektu fotometrian mezuron.
2. Agordu la ondolongon kiel 660nm.
3. Enŝaltu la akvobanon, agordu la temperaturon al 37℃, certigu la temperaturon neŝanĝita dum 3-5 minutoj.
4. Antaŭvarmigu 0.5mL-substraton en 2mL-centrifuga tubo ĉe 37℃ akvobano dum 10min.
5. Ekstraktu 0.5mL diluitan enziman solvon en la antaŭvarmigitan centrifugan tubon dum 10 minutoj.Agordu enziman diluilon kiel malplenan grupon.
6. Aldonu 1.0 mL TCA-reaktivon tuj post la reago.Miksu bone kaj kovu en akvobano dum 30 minutoj.
7. Centrifuga reag solvo.
8. Aldonu la sekvajn komponantojn en la specifita ordo.
| Reakciilo | Volumo |
| Supernatant | 0,5 ml |
| 0.4M Natria karbonato | 2,5 ml |
| Folin-fenola reakciilo | 0,5 ml |
9. Miksu bone antaŭ kovado en akvobano je 37℃ dum 30 minutoj.
10. OD660estis determinita kiel OD1;malplena kontrolgrupo: Enzimdiluilo estas uzata por anstataŭigi enzimsolvon por determini OD660kiel OD2, ΔOD=OD1-OD2.
11. L-tirozina norma kurbo: 0.5mL malsama koncentriĝo L-tirozina solvo, 2.5mL 0.4M Natria karbonato, 0.5mL Folin-fenola reakciilo en 5mL centrifuga tubo, kovu en 37℃ dum 30min, detekti por OD.660por malsama koncentriĝo de L-tirozino, tiam akiris la norman kurbon Y=kX+b, kie Y estas la L-tirozina koncentriĝo, X estas OD600.
Kalkulo
2: Tuta volumo de reagsolvo (mL)
0.5: Volumo de enzimsolvo (mL)
0.5: Reakcia likva volumeno uzata en kromogena determino (mL)
10: Tempo de reago (min)
Df: Diluo multobla
C: Enzima koncentriĝo (mg/mL)
Figuroj
Fig.1 DNA-restaĵo
| Specimeno | Ave C4 | Nuklea Acido Reakiro (pg/mg) | Retrovo(%) | Tuta Nukleo Acido ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-Libera H2O | Nedeterminita | — | — | — |
Fig.2 Optimuma pH
Fig.3 Optimuma temperaturo
Fig.4 pH Stabileco
Fig.5 Termika stabileco
Fig.6 Stoka stabileco ĉe 25℃
