Unu Paŝo RT-qPCR SYBR Verda Premikso
Kato-N-ro: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix estas por fluoreskeca kvantigo bazita sur SYBR Green I tinkturfarbo.Uzante gen-specifajn enkondukojn, inversa transskribo kaj qPCR-reagoj estas kompletigitaj en unu tubo, forigante la bezonon de ripetaj kap-malfermaj kaj pipetaj operacioj, multe plibonigante analizefikecon kaj reduktante la riskon de poluado.Por RNA-provaĵoj, la ilaro utiligas varmorezistan Reverse Transcriptase por efika cDNA-sintezo kaj HotStart Taq DNA Polymerase por kvanta plifortigo.Sub la optimumigita bufrosistemo, la sentemo de la ilaro povas esti same alta kiel 0.1 pg por alte esprimitaj celoj kaj same alta kiel 1 pg por modere esprimitaj celoj.La ilaro taŭgas por plifortigo kaj kvantigo de DNA-provaĵoj.Ĝi ebligas la senteman detekton kaj kvantigon de nukleaj acidoj de malsamaj plantoj kaj bestaj specimenoj, ĉeloj kaj mikroorganismoj.
Komponentoj
| No | Nomo | Volumo | Volumo |
| 1 | Altnivela Buffer | 250 μL | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Altnivela Enzima Miksaĵo | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase Libera H2O | 250 μL | 2 × 1,25 ml |
Kondiĉoj de Stokado
Ĉi tiu produkto devas esti konservita je -25 ~ -15 ℃ for de lumo dum 1 jaro.
Instrukcioj
1.Reaga sistemo-agordod
| Komponentoj | Volumo (μL) | Volumo (μL) | Fina koncentriĝo |
| Altnivela Buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Altnivela Enzima Miksaĵo | 1 | 2 | - |
| Antaŭen Enkonduko (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Inversa Enkonduko (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase Libera H2Oc | al 25 | al 50 | - |
Notoj:
1) a.TLa fina primerkoncentriĝo estis 0,2 μmol/L, kiu ankaŭ povus esti alĝustigita inter 0,1 kaj 1 μmol/L kiel konvene.
2) b.La reakciilo estas ekstreme sentema, kun Totala RNA en la intervalo de 1pg-1μg, kaj testado de homaj specimenoj montris optimuman enigaĵon de 1 pg-100 ng, kontrolante por totala Ct-valoro en la intervalo de 15-30 kiel konvene.
3) ĉ.Oni rekomendas uzi 20μL aŭ 50μL por certigi la validecon kaj reprodukteblecon de cela gena plifortigo.
4) d.Bonvolu prepari en la ultra-pura benko kaj uzi nukleazajn restaĵojn-liberajn konsiletojn kaj reagajn tubojn;konsiletoj kun filtrilaj kartoĉoj estas rekomenditaj.Evitu krucan poluadon kaj aerosolan poluadon.
2.Programo de reago
| Cikla paŝo | Temp. | Tempo | Cikloj |
| Inversa transskribo | 50℃a | 6 minutoj | 1 |
| Komenca denaturado | 95℃ | 5 minutoj | 1 |
| Plifortiga reago | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sek | ||
| Degela kurba etapo | Instrumentaj Defaŭltoj | 1 | |
Notoj:
1) a.La inversa transskriba temperaturo povas esti elektita inter 50-55 °C laŭ la eksperimentaj bezonoj.Por DNA-provaĵoj, la inversa transskriba procezo povas esti preterlasita.
2) b.En specialaj kazoj la kalcia/etendiga temperaturo povas esti ĝustigita laŭ la amora Tm-valoro, 60 °C rekomendas.
Notoj
1. Ĉi tiu produkto estas nur por esploruzo.
2. Bonvolu operacii per laboratorio-manteloj kaj forĵeteblaj gantoj, por via sekureco.
