Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kato-N-ro: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) estas plurkvanta kvanta PCR-aro bazita sur RNA kiel ŝablono.En la procezo de la eksperimento, inversa transskribo kaj kvanta PCR estis efektivigitaj en la sama tubo, kio simpligis la eksperimentan operacion kaj reduktis la riskon de poluado.En ĉi tiu ilaro, la unua fadeno cDNA estis efike sintezita per varmega Reverse Transcriptase kaj kvante plifortigita per HotStart Tag DNA Polymerase.La ilaro ĉefe enhavas optimumigitan MP-bufferon, enzimajn miksaĵojn, ktp. La bufrosolvo jam enhavas Mg2+kaj dNTP.Krome, aldoniĝas la faktoroj, kiuj povas efike malhelpi la nespecifan PCR-amplifikon kaj plibonigi la plifortigan efikecon de multoblaj qPCR-reagoj, kiuj povas certigi la plifortigan efikecon kaj efektivigi ĝis multoblajn plifortigajn reagojn.La dUTP/UDG-sistemo estis aldonita por efike malhelpi la riskon de aerosolpoluado.
Komponentoj
1. Bufro
2. Enzima Miksaĵo
Specifo
| Varma Komenco | Enkonstruita varma starto |
| Detekta metodo | Primer-sonda detekto |
| PCR-metodo | Unu paŝo RT-qPCR |
| Polimerazo | Taq DNA-polimerazo |
| Tipo de specimeno | DNA |
Kondiĉoj de Stokado
La produkto estas sendita kun seka glacio kaj povas esti konservita je -25 ~ -15 ℃ dum 1 jaro.Ĝi devus eviti oftajnfrosti-degeli.Oni rekomendas konservi aparte.
Instrukcioj
1.Reago Sistemo
| Komponentoj | Volumo (μL) | Fina Koncentriĝo |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Enzima Miksaĵo | 1 | - |
| Enkonduko/Enketmiksaĵo (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Ŝablono RNA | 1-10 | - |
| RNase Libera H2O | al 25 | - |
Notoj:
Nepre miksu bone antaŭ uzo, evitu troajn bobelojn kaŭzitajn de perforta vibro.
a.Primer-koncentriĝo: Primer-miksaĵo inkluzive de multipleksa enkonduko, depende de la situacio optimuma enkonduka koncentriĝo eble inter 0.l kaj 1.0μM.
b.Sondikoncentriĝo: Sonda miksaĵo inkluzive de plurseksa sondila etikeddiferenca fluoreska grupo, depende de la situacio optimuma sonda koncentriĝo eble inter 0.05 kaj 0.5μM.
c.Ŝablonodiluo: qPCR estas tre sentema kaj rekomendas dilui la ŝablonon.La kontrolo Ct-valoro taŭgas inter 20 kaj 35.
d.Sistempreparo: Bonvolu prepari en la ultra pura labortablo, kaj pipettor kaj reaktubo sen nuclease-restaĵo;oni rekomendas uzi la pafilon kapon kun filtrila elemento.Evitu krucan poluadon kaj aerosolan poluadon.
2. Optimumigita BicikladoProtokolo
| Ciklo paŝo | Temp. | Tempo | Cikloj |
| Inversa transskribo | 50℃a | 20 minutoj | 1 |
| Komenca-malnaturado | 95℃ | 5 minutoj | 1 |
| Plifortiga reago | 95℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sek c |
Notoj:
a.Inversa transskribo: La temperaturo povas elekti 42 °C aŭ 50 °C.
b.Plifortiga reago: La temperaturo estas ĝustigita laŭ la Tm-valoro de la dezajnitaj enkondukoj.
c.Akiro de fluoreskeca signalo: Bonvolu agordi la eksperimentan proceduron laŭ la postuloj de la manlibro pri instrumento.
Notoj
Bonvolu porti la necesan PPE, kiel laboratorio-mantelo kaj gantoj, por certigi vian sanon kaj sekurecon.
