2×Sensi Direct Premix-UNG (Enketo qPCR)
Kato-N-ro: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) estas dizajnita por elfari PCR rekte de provaĵoj sen DNA-eltiro aŭ specimena preparado.Tiu reakciilo konsistas el varma-komenca DNA-polimerazo, uracil DNA-glikozilazo (UNG), RNase-Inhibitoro, MgCl2, dNTPoj (kun dUTP anstataŭe de dTTP), kaj stabiligiloj, por kvanta PCR (qPCR).Ĉi tiu reakciilo antaŭformas altan inhibitoro-toleremon, kaj tiel ĝi povas esti rekte aplikita al la detekto de provaĵoj kiel gorĝa lampo, salivo, kontraŭ-koagulita tuta sango, plasmo, kaj serumo sen DNA-eltiro.La reakciilo uzas proprietan bufron por qPCR kun miksitaj enzimoj de kontraŭ-inhiba DNA-polimerazo kaj UNG-enzimo.Tial ĝi povas akiri bonan plifortigon de celgenoj en specimenoj enhavantaj inhibitorojn kaj malhelpi malveran pozitivan plifortigon kaŭzitan de PCR-restanta kaj aerosolpoluado.Ĉi tiu reakciilo kongruas kun la plej multaj fluoreskaj kvantaj PCR-instrumentoj, kiel Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ktp.
Komponentoj
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG-Miksaĵo
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Kondiĉoj de konservado
Ĉiuj komponantoj devas esti konservitaj je -20 ℃ por longtempa konservado kaj 4 ℃ dum ĝis 3 monatoj.Bonvolu miksi plene post degelo kaj centrifugi antaŭ ol uzi.Evitu oftan frostig-degelon.
Protokolo pri biciklado
| Paŝo | Temperaturo | Tempo | Ciklo |
| Digestado | 50℃ | 2 min | 1 |
| Aktivigo de polimerazo | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20-aj jaroj | 40-50 |
| Kolcigado/Etendado | 56-64℃ | 20-60-aj jaroj |
Pipetado-Instrukcioj
| Reakciilo | Volumo po reago | Volumo per reago | Fina Koncentriĝo |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 µL | 25 µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzimo/UNG-Miksaĵo | 0,5 µL | 1 µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Specimeno3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Totala volumo | 25 μL | 50 μL | - |
1. La fina koncentriĝo de primero estas kutime 0.2μM.Por pli bonaj rezultoj, la unua koncentriĝo povas esti optimumigita en la intervalo de 0.2-1μM.
2. Ĝenerale, la sonda koncentriĝo povas esti optimumigita ene de la gamo de 0.1-0.3μM.La optimuma koncentriĝo de la sondilo rilatas al la realtempa PCR-amplifilo, la speco de enketo kaj la speco de fluoreska etikedsubstanco.Bonvolu raporti al la manlibro de la instrumento aŭ al la specifaj postuloj de ĉiu fluoreska sondilo.
3. Malsamaj specoj de specimenoj enhavas malsamajn specojn kaj enhavon de inhibitoro kaj kopian nombron de cela geno.La specimena volumo devas esti konsiderata laŭ reala kondiĉo.Faru diluon de la specimeno aldonante sennukleaz-liberan akvon aŭ TE Buffer, se necese.
4. Rekomendita volumo de malsamaj specimenoj:
| Specimeno | Volumo por unu 50 μL reago | Maksimumo rilatumo |
| Antikoagulita tuta sango | 2,5 μL | 5% |
| Plasmo | 15 μL | 30% |
| Serumo | 10 μL | 20% |
| Gorĝŝubo | 10 μL | 20% |
| Salivo | 10 μL | 20% |
Kontrolo de kvalito
1. Funkcia detekto: sentemo, specifeco kaj ripeteblo de qPCR.
2. Neniu eksogena nuclease aktiveco: neniu eksogena endonuclease kaj exonuclease poluado.
Notoj de Produkto
1. Ĉi tiu produkto uzas novan tipon de varmega DNA-polimerazo, kiu povas esti aktivigita en 1-5 minutoj. Ĉar ĝia reago-bufro estis optimumigita, ĝi estas pli taŭga por duobla aŭ multobla fluoreskeca kvanta PCR per sonda metodo.
2. Se la Rn-valoro de la PCR-amplificado estas tro malalta aŭ la plifortigo estas evidente malhelpita, malpliigante la specimenan kvanton, pliigante reakcian volumon aŭ antaŭa diluo de la specimeno povas plibonigi la rezultojn.
3. La kolekto de sango, salivo, urino, gorĝo-svapo ktp devas sekvi la klinikajn kriteriojn postulojn, kaj freŝa specimeno povas esti uzata por malhelpi nuklean acidan degradadon.
4. Ĉar malsamaj amplikonoj havas malsaman utiligan efikecon al dUTP kaj sentemon al UNG, la reakciiloj devus esti optimumigitaj se la detekta sentemo malpliiĝas kiam oni uzas UNG-sistemon.Bonvolu kontakti nin por teknika subteno se necese.
5. Por eviti plifortigon de reportaj PCR-produktoj inter unu-paŝaj reagoj, dediĉita eksperimenta areo kaj pipeto estas postulataj por plifortigo.Funkcii per gantoj kaj ŝanĝi ofte kaj ne malfermu la reagotubon post PCR-amplifiko.
