2×HiF Taq plus Master Mix
Kato-N-ro: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Kun Tinkturfarbo) estas preta uzebla 2×premiksita solvo enhavanta Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs, kaj optimumigitan bufron.Du unuklonaj antikorpoj ĉe ĉambra temperaturo kiuj malhelpas polimerazaktivecon kaj 3′→5′eksonukleazaktivecon estas aldonitaj al la majstra miksaĵo por facile kaj tre specifa Hot Start PCR.La etendaĵfaktoro estas aldonita al la majstra miksaĵo por doni al la enzimo longan fragmentan plifortigan kapaciton, la longo de la plifortigo povas esti ĝis 13 kb, la enzimo havas 5′→3′ DNA-polimerazan aktivecon kaj 3′→5′. eksonukleaza agado, ĝia fideleco estas 83 fojojn tiu de Taq DNA-polimerazo, kio estas 9 fojojn tiu de ordinara DNA-polimerazo.Ĝi taŭgas por plifortigo de kompleksaj ŝablonoj, la plifortiga produkto estas malakra fino.
2×HIF Taq plus Master Mix (Kun Tinkturfarbo) havas la avantaĝojn de rapida kaj facila, alta sentemo, forta specifeco, bona stabileco, ktp., la reagsistemo nur bezonas aldoni enkondukojn kaj ŝablonojn, kaj povas esti plifortigita per du- paŝa protokolo, simpligante la eksperimentajn paŝojn kaj ŝparante tempon.Ĉi tiu produkto enhavas elektroforezajn indikilfarbojn, kaj PCR-produktoj povas esti uzataj rekte por elektroforezo.Krome, la produkto ankaŭ enhavas specifan protektan agenton, tiel ke la majstra miksaĵo povas konservi stabilan agadon post ripeta frosto-degelo.
Kondiĉoj de Stokado
Produktoj devas esti konservitaj je -25 ~ -15 ℃ dum 1 jaro.
Specifoj
Specifo de produkto | Majstra Miksaĵo |
Koncentriĝo | 2× |
Varma Komenco | Enkonstruita Varma Starto |
Superpendanto | Malakra |
Reakcia rapideco | Rapida |
Grandeco (Fina Produkto) | Ĝis 13 kb |
Kondiĉoj por transportado | Seka glacio |
Produkta tipo | Altfidelaj PCR-premiksaĵoj |
Instrukcioj
1.PCR-Reaga Sistemo
Komponentoj | Volumo (μL) |
DNA-Ŝablono | Taŭga |
Antaŭen enkonduko (10 μmol/L) | 2.5 |
Inversa Enkonduko (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
ddH2O | al 50 |
2.Rekomendita uzado de malsamaj ŝablonoj
Tipo de ŝablono | Plifortigu fragmentojn de 1 kb ĝis 10 kb |
Genoma DNA | 50 ng-200 ng |
Plasmido aŭ Viral DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2.5 µL (Ne superu 10% de la fina PCR-reagvolumeno) |
3.Plifortiga Protokolo
1) Dupaŝa Protokolo (kompleksa ŝablono)
Cikla paŝo | Temp. | Tempo | Cikloj |
Komenca denaturado | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturado | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Etendo | 68℃ | 30 sek/kb | |
Fina etendo | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Tripaŝa Protokolo (regula protokolo)
Cikla paŝo | Temp. | Tempo | Cikloj |
Komenca denaturado | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturado | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Kolekti | 60℃ | 20 sek | |
Etendo | 72℃ | 30 sek/kb | |
Fina etendo | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Protokolo pri Kolektiga Gradiento (kompleksecŝablono)
Cikla paŝo | Temperaturo | Tempo | Cikloj |
Komenca denaturado | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturado | 98℃ | 10 sek | 15 (1℃ redukto per ciklo) |
Gradienta recocido | 70-55℃ | 20 sek | |
Etendo | 72℃ | 30 sek/kb | |
Denaturado | 98℃ | 10 sek |
20 |
Kolekti | 55℃ | 20 sek | |
Etendo | 72℃ | 30 sek/kb | |
Fina etendo | 72℃ | 5 min | 1 |
Trajtoj sub malsama protokolo de plifortigo
Protokol | Du-Paŝo | Tri-paŝa | Gradienta recocido |
Spec. | rapida | mediumo | malrapida |
Specifeco | alta | mediumo | alta |
PCR-rendimento | mediumo | alta | mediumo |
Detekta indico | alta | mediumo | alta |
Notoj
Bonvolu porti la necesan PPE, tiajn laboratoriomantelon kaj gantojn, por certigi vian sanon kaj sekurecon!