Universala SYBR VERDA qPCR-Premiksaĵo (Blua)
Kato-N-ro: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) estas antaŭ-solvo por 2×realtempa kvanta PCR-amplifilo karakterizita de alta sentemo kaj specifeco, estas blua koloro kaj havas la efikon de specimena aldono-spurado.La kernkomponento Taq DNA-polimerazo uzas antikorpan varman ekfunkciigon por efike malhelpi nespecifan plifortigon pro amora kalciado dum specimena preparado.Samtempe, la formulo aldonas la promociajn faktorojn por plibonigi la plifortigan efikecon de PCR-reago kaj egaligi la plifortigon de genoj kun malsamaj GC-enhavoj (30 ~ 70%), tiel ke kvanta PCR povas akiri bonan linearan rilaton en larĝa kvanta. regiono.Ĉi tiu produkto enhavas specialan ROX Passive Reference Dye, kiu aplikeblas al plej multaj qPCR-instrumentoj.Ne necesas ĝustigi la koncentriĝon de ROX sur malsamaj instrumentoj.Necesas nur aldoni enkondukojn kaj ŝablonojn por prepari la reagsistemon por plifortigo.
Komponentoj
Universala Blua qPCR Majstra Miksaĵo
Kondiĉoj de konservado
La produkto estas sendita kun glaciaj pakoj kaj povas esti konservita je -25℃ ~ -15℃ dum 18 monatoj.Necesas eviti fortan luman surradiadon dum konservado aŭ preparado de la reagsistemo.
Specifo
| Koncentriĝo | 2× |
| Detekta metodo | SYBR |
| PCR-metodo | qPCR |
| Polimerazo | Taq DNA-polimerazo |
| Tipo de specimeno | DNA |
| Aplika ekipaĵo | Plej multaj qPCR-instrumentoj |
| Produkta tipo | SYBR-premiksaĵo por realtempa fluoreskeca kvanta PCR |
| Apliki al (aplikaĵo) | Gena Esprimo |
Instrukcioj
1.Reaga Sistemo
| Komponentoj | Volomo (μL) | Volomo (μL) | Fina Koncentriĝo |
| Universala SYBR VERDA qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Antaŭen Enkonduko (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol/L |
| Inversa Primero (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | ĝis 50 | ĝis 20 | - |
[Noto]: Miksu plene antaŭ uzo por eviti troajn vezikojn pro vigla skuado.
a) Primer-koncentriĝo: La fina primer-koncentriĝo estas 0.2μmol/L, kaj ankaŭ povas esti ĝustigita inter 0.1 kaj 1.0μmol/L kiel konvene.
b) Ŝablona koncentriĝo: Se la ŝablono estas nediluita cDNA akcia solvaĵo, la volumeno uzata ne devus superi 1/10 de la totala volumo de la qPCR-reago.
c) Ŝablono-diluo: Oni rekomendas dilui la cDNA-akcian solvon 5-10 fojojn.La optimuma kvanto de ŝablono aldonita estas pli bona kiam la Ct-valoro akirita per plifortigo estas 20-30 cikloj.
d) Reagsistemo: Oni rekomendas uzi 20μL aŭ 50μL por certigi la efikecon kaj ripeteblon de cela gena plifortigo.
e) Sistempreparo: Bonvolu prepari en la superpura benko kaj uzi la konsiletojn kaj reagajn tubojn sen nukleazaj restaĵoj;oni rekomendas uzi la konsiletojn kun filtrilaj kartoĉoj.Evitu krucan poluadon kaj aerosolan poluadon.
2.Programo de reago
Norma Programo
| Cikla paŝo | Temp. | Tempo | Cikloj |
| Komenca denaturado | 95℃ | 2 min | 1 |
| Denaturado | 95℃ | 10 sek | 40 |
| Kolcigado/Etendado | 60℃ | 30 sek★ | |
| Degela kurba etapo | Instrumentaj Defaŭltoj | 1 | |
Rapida Programo
| Cikla paŝo | Temp. | Tempo | Cikloj |
| Komenca denaturado | 95℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturado | 95℃ | 3 sek | 40 |
| Kolcigado/Etendado | 60℃ | 20 sek★ | |
| Degela kurba etapo | Instrumentaj Defaŭltoj | 1 | |
[Noto]: La rapida programo taŭgas por la granda plimulto de genoj, kaj normaj programoj povas esti provitaj por individuaj kompleksaj sekundaraj strukturgenoj.
a) Temperaturo kaj tempo de Kolektigado: Bonvolu ĝustigi laŭ la longo de enkonduko kaj cela geno.
b) Akiro de fluoreska signalo (★): Bonvolu agordi la eksperimentan proceduron laŭ la postuloj en la instrukcioj por uzado de la instrumento.
c) Fandkurbo: La instrumenta defaŭlta programo povas esti uzata normale.
3. Rezulta Analizo
Minimumo de tri biologiaj kopioj estis postulataj por kvantaj eksperimentoj.Post la reago, la plifortiga kurbo kaj fandanta kurbo devas esti konfirmitaj.
3.1 Plifortiga kurbo:
La norma plifortiga kurbo estas S-forma.Kvanta analizo estas plej preciza kiam la Ct-valoro falas inter 20 kaj 30. Se Ct-valoro estas malpli ol 10, necesas dilui la ŝablonon kaj fari la teston denove.Kiam la Ct-valoro estas inter 30-35, necesas pliigi la ŝablonkoncentriĝon aŭ la volumon de la reagsistemo, por plibonigi la plifortigan efikecon kaj certigi la precizecon de rezulta analizo.Kiam la Ct-valoro estas pli granda ol 35, la testrezultoj ne povas kvante analizi la esprimon de la geno, sed povas esti uzataj por kvalita analizo.
3.2 Fandkurbo:
La ununura pinto de la fanda kurbo indikas ke la reagspecifeco estas bona kaj kvanta analizo povas esti farita;se la fanda kurbo montras duoblajn aŭ multoblajn pintojn, kvanta analizo ne povas esti farita.La fanda kurbo montras duoblajn pintojn, kaj estas necese juĝi ĉu la ne-cela pinto estas amordimero aŭ nespecifa plifortigo per DNA-agaroza ĝelelektroforezo.Se ĝi estas enkonduka dimero, oni rekomendas redukti la enkondukan koncentriĝon aŭ restrukturi enkondukojn kun alta plifortiga efikeco.Se ĝi estas nespecifa plifortigo, bonvolu pliigi la kalsontemperaturon, aŭ restrukturi la enkondukojn kun specifeco.
Notoj
Bonvolu porti la necesan PPE, tiajn laboratoriomantelon kaj gantojn, por certigi vian sanon kaj sekurecon!
Ĉi tiu produkto estas NUR por esploruzo!
