Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) estas unu-fadena polipeptido enhavanta 4 disulfidobligaciojn kun molekulpezo de proksimume 13.7 kDa.RNase A estas endoribonuclease kiu specife degradas unu-fadenan RNA ĉe C kaj U-restaĵoj.Specife, la fendetaĵo rekonas la fosfodisteran ligon formitan de la 5′-ribozo de nukleotido kaj la fosfatgrupo sur la 3′-ribozo de la apuda pirimidinnukleotido, tiel ke la 2, 3′-ciklaj fosfatoj estas hidroligitaj al la ekvivalentaj 3. ′nukleozidfosfatoj (ekz. pG-pG-pC-pA-pG estas fendita de RNase A por generi pG-pG-pCp kaj A-PG).RNase A estas la plej aktiva en fendado de unu-fadena RNA.Rekomendita laborkoncentriĝo estas 1-100μG/mL, kongrua kun diversaj reagsistemoj.Malalta salkoncentriĝo (0-100 mM NaCl) povas esti uzita por tranĉi unu-fadenan RNA, duoble-fadenan RNA, kaj RNA-ĉenojn formitajn per RNA-DNA hibridiĝo.Tamen, ĉe alta salkoncentriĝo (≥0.3 M), RNase A nur specife fendas unu-fadenan RNA.
RNase A estas plej ofte uzata por forigi RNA dum la preparado de plasmida DNA aŭ genoma DNA. Ĉu aŭ ne DNase estas aktiva dum la preparprocezo povas facile influi la reagon.La tradicia metodo de bolado en akvobano povas esti uzata por malaktivigi DNase-agadon.Ĉi tiu produkto ne enhavas DNazon kaj proteazon, kaj ne postulas varman traktadon antaŭ uzo.Krome, ĉi tiu produkto ankaŭ povas esti uzata en molekula biologiaj eksperimentoj kiel ekzemple RNase-protekta analizo kaj RNA-sekvencanalizo.
Kondiĉoj de Stokado
La produkto povas esti stokita ĉe -25~-15℃, valida dum 2 jaroj.
Instrukcioj
Ĉi tiu estas unu el la oftaj metodoj por prepari RNase A stokan solvon.Ĝi ankaŭ povas esti preparita dealiaj metodoj laŭ la tradiciaj metodoj en la laboratorio aŭ referenca literaturo (kiel ekzemplerekte solvante en 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 aŭ Tris-NaCl-solvo)
1. Uzu 10 mM natrian acetaton (pH 5.2) por prepari 10 mg/mL da RNase A stoka solvo
2. Hejtado ĉe 100 ℃ dum 15 min
3. Malvarmu al ĉambra temperaturo, aldonu 1/10 volumon de 1 M Tris-HCl (pH 7,4), ĝustigu ĝian pH al 7,4 (porEkzemple, aldonu 500 ml da 10g/ml RNase-stoka solvo 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Subpakita je -20℃ por frostita stokado, kiu povas esti stabila ĝis 2 jaroj.
[Notoj]: Dum bolado de RNaseA-solvo sub neŭtralaj kondiĉoj, RNase-pluvo formiĝos;Boligu ĝin je pli malalta pH, kaj se estas precipitaĵo, ĝi povas esti observita, kiu povas esti kaŭzita de la ĉeesto de proteinaj malpuraĵoj.Se sedimento estas trovita post bolado, malpuraĵoj povas esti forigitaj per altrapida centrifugado (13000rpm), kaj tiam sub-pakitaj por frostigado.
Produktaj informoj
| Sinonimoj | Ribonukleazo I;Ribonukleazo pankreata;Ribonukleazo 3'-pirimidnooligonucleotidohidrolazo;Rnazo A;Endoribonulcezo I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Aspekto | Blanka liofiligita pulvoro |
| Molekula pezo | ~ 13.7kDa (aminoacidsekvenco) |
| Ph-valoro | 7.6 (agadintervalo 6-10) |
| Taŭga Temperaturo | 60℃ (Agadintervalo 15-70℃) |
| Aktiviga agento | Na2+.K+ |
| Inhibitoro | Rnazo-inhibitoro |
| Malaktiviga metodo | Ne povas malaktivigi per hejtado, oni sugestas uzi centrifugan kolonon |
| Origino | Bovino |
| Solveco | Solvebla en akvo (10 mg/ml) |
| Perdo sur seka | ≤5.0% |
| Enzima aktiveco | ≥60 Kunitz-unuoj/mg |
| Izoelektra punkto | 9.6 |
Notoj
Por via sekureco kaj sano, bonvolu porti laboratoriajn mantelojn kaj foruzeblajn gantojn por operacio.
