Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) estas unu-fadena polipeptido enhavanta 4 disulfidobligaciojn kun molekulpezo de proksimume 13.7 kDa.RNase A estas endoribonucleazo kiu specife degradas unu-fadenan RNA ĉe C kaj U-restaĵoj.Specife, la fendetaĵo rekonas la fosfodiesteran ligon formitan de la 5'-ribozo de nukleotido kaj la fosfatgrupo sur la 3'-ribozo de la apuda pirimidinnukleotido, tiel ke la 2,3'-ciklaj fosfatoj estas hidroligitaj al la ekvivalentaj 3. 'nukleozidfosfatoj (ekz., pG-pG-pC-pA-pG estas fendita de RNase A por generi pG-pG-pCp kaj A-PG).RNase A estas la plej aktiva en fendado de unu-fadena RNA.Rekomendita laborkoncentriĝo estas 1- 100 μ G/mL, kongrua kun diversaj reagsistemoj.Malalta salkoncentriĝo (0-100 mM NaCl) povas esti uzita por tranĉi unu-fadenan RNA, duoble-fadenan RNA, kaj RNA-ĉenojn formitajn per RNA-DNA hibridiĝo.
Tamen, ĉe alta salkoncentriĝo (≥0.3 M), RNase A nur specife fendas unu-fadenan RNA.
RNase A kutimas plej ofte forigi RNA dum la preparado de plasmida DNA aŭ genoma DNA.Ĉu aŭ ne DNase estas aktiva dum la preparprocezo povas facile influi la reagon.La tradicia metodo de bolado en akvobano povas esti uzata por malaktivigi DNase-agadon.Ĉi tiu produkto ne enhavas DNazon kaj proteazon, kaj ne postulas varman traktadon antaŭ uzo.Krome, ĉi tiu produkto ankaŭ povas esti uzata en molekula biologiaj eksperimentoj kiel ekzemple RNase-protekta analizo kaj RNA-sekvencanalizo.
Kondiĉoj de konservado
La produkto devas esti konservita je -25 ℃ ~ - 15 ℃ dum 2 jaroj.
Specifoj
| Aspekto | Pulvoro |
| Kvanto | 100 mg / 1 g |
| Produkta tipo | RNase A |
Instrukcioj
Ĉi tiu estas unu el la oftaj metodoj por prepari RNase A stokan solvon.Ĝi ankaŭ povas esti preparitaper aliaj metodoj laŭ la tradiciaj metodoj en la laboratorio aŭ referenca literaturo (kiel ekzemplerekte solvante en 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 aŭ Tris-NaCl-solvo)
1. Uzu 10 mM natria acetato (pH 5.2) por prepari 10 mg/mL da RNase A stoka solvo.
2. Hejtado ĉe 100 ℃ dum 15 min.
3. Malvarmu al ĉambra temperaturo, aldonu 1/10 volumon de 1 M Tris-HCl (pH 7,4), ĝustigu ĝian pH al 7,4 (porekzemple, aldonu 500 mL de 10 mg/mL RNase-stoka solvo 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. Subpakita je -20℃ por frostita stokado, kiu povas esti stabila ĝis 2 jaroj.
[Notoj]:
Kiam oni bolas RNaseA-solvon sub neŭtralaj kondiĉoj, formiĝos RNase-pluvo;Boligu ĝin je pli malalta pH, kaj se estas precipitaĵo, ĝi povas esti observita, kiu povas esti kaŭzita de la ĉeesto de proteinaj malpuraĵoj.Se sedimento estas trovita post bolado, malpuraĵoj povas esti forigitaj per altrapida centrifugado (13000rpm), kaj tiam sub-pakitaj por frostigado.
Notoj
Bonvolu porti la necesan PPE, tiajn laboratoriomantelon kaj gantojn, por certigi vian sanon kaj sekurecon.
