Rnase-inhibitoro (sen glicerino)
Murine RNase inhibitor estas rekombina murine RNase inhibitor esprimita kaj purigita de E.coli.Ĝi ligas al RNase A, B aŭ C en rilatumo 1:1 per ne-kovalenta ligo, tiel malhelpante la agadon de la tri enzimoj kaj protektante RNA de degenero.Tamen, Ĝi ne efikas kontraŭ RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H aŭ RNase de Aspergillus.Murina RNase-inhibitoro estis testita per RT-PCR, RT-qPCR kaj IVT mRNA, kaj estis kongrua kun diversaj komercaj Inversaj transkriptazoj, DNA-polimerazoj kaj RNA-polimerazoj.
Kompare al homaj RNase-inhibitoroj, murina RNase-inhibitoro ne enhavas du cisteinojn kiuj estas tre sentemaj al oksigenado kiu kaŭzas malaktivigon de la inhibitoro.Tio igante ĝin stabila ĉe malaltaj koncentriĝoj de DTT (malpli ol 1 mM).Ĉi tiu funkcio igas ĝin taŭga por uzo en reagoj kie altaj koncentriĝoj de DTT estas malfavoraj al la reago (ekz. Realtempa RT-PCR).
Aapliko
Ĉi tiu produkto povas esti vaste uzata en iu ajn eksperimento kie RNase-interfero eblas eviti RNA-degeneron, kiel ekzemple:
1.First-fadena cDNA-sintezo, RT-PCR, RT-qPCR, ktp.;
2. Protektu RNA kontraŭ degradado en in-vitro transskribo/tradukado (ekz. virusreproduktado en vitro);
3.Inhibicio de RNase-agado dum RNA-izolado kaj purigo.
Kondiĉoj de Stokado
Konservu ĉe -25～-15℃;
Frostiĝ-degelocikloj ≤ 5 fojojn;
Valida por 1 jaro.
Unuodifino
Unu unuo estas difinita kiel la kvanto de RNase Inhibitor necesa por malhelpi la agadon de 5 ng de RNase A je 50%.
Molekula pezo
RNase Inhibitor (glicerol-libera) estas 50 kDa proteino.
Kontrolo de kvalito
Eksonukleazo Aktiveco:
Kovado de 40 U da enzimo kun 1 μg λ-Hind III digesta DNA dum 16 horoj je 37 °C rezultigis neniun konstateblan degeneron de la DNA kiel determinite per ĝelelektroforezo.
Endonukleaza Agado:
Kovado de 40 U da enzimo kun 1 μg λ DNA dum 16 horoj je 37 °C rezultigis neniun konstateblan degeneron de la DNA kiel determinite per ĝelelektroforezo.
Nicking Aktiveco:
Kovado de 40 U da enzimo kun 1 μg pBR322 dum 16 horoj je 37 ℃ rezultigis neniun konstateblan degeneron de la DNA kiel determinite per ĝelelektroforezo.
RNazo Aktiveco:
Kovado de 40 U da enzimo kun 1.6 μg MS2 RNA dum 4 horoj je 37℃ rezultigis neniun konstateblan degeneron de la RNA kiel determinite per ĝelelektroforezo.
E.coli DNA:
40 U de Enzimo estas detektitaj per TaqMan qPCR.La DNA de E.coli estas ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1.Ne skuu aŭ movu perforte por malhelpi enziman malaktivigon.
2.RNase-inhibitoro estas aktiva ĉe temperaturoj de 25℃ ĝis 55℃ kaj estas malaktivigita je ≥65℃.
3.La agado de RNase H, RNase 1 kaj RNase T1 ne estas malhelpita.
4.La pH-gamo por malhelpi RNase-aktivecon estas larĝa (aktiva ĉe pH 5-9), elmontrante maksimuman aktivecon ĉe pH 7-8.
