Virala DNA/RNA Eltira Ilaro
Ĉi tiu ilaro taŭgas por la rapida eltiro de altpura virusa DNA/RNA de specimenoj kiel nazofaringaj swaboj, mediaj lamboj, ĉelkulturo supernatante, kaj histo homogena supernatante.La ilaro baziĝas sur silika membranpuriga teknologio, kiu forigas la bezonon uzi fenolon/kloroformajn organikajn solvilojn aŭ temporaban alkoholan precipitaĵon por ĉerpi virusan DNA/RNA de alta kvalito.La nukleaj acidoj akiritaj estas liberaj de malpuraĵoj kaj pretaj por uzo en kontraŭfluaj eksperimentoj kiel inversa transskribo, PCR, RT-PCR, realtempa PCR, venontgeneracia sekvencado (NGS), kaj Northern blot.
Kondiĉoj de konservado
Konservu je 15 ~ 25℃, kaj transportu ĉe ĉambra temperaturo
Komponentoj
| Komponentoj | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| RNazo-libera ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA-Kolumnoj | 100 |
| Kolektaj Tuboj (2 ml) | 100 |
| RNase-liberaj Kolektaj Tuboj (1.5ml) | 100 |
Bufro VL:Provizu medion por lizo kaj ligado.
Bufro RW:Forigu restajn proteinojn kaj aliajn malpuraĵojn.
RNazo-libera ddH2O:Eluu DNA/RNA de la membrano en la spinkolono.
FastPure RNA-Kolumnoj:Specife adsorbi DNA/RNA.
Kolektaj Tuboj 2 ml:Kolektu filtriton.
Kolektaj Tuboj sen RNase 1,5 ml:Kolektu DNA/RNA.
Aplikoj
Nazofaringaj lamvoj, mediaj lamvoj, ĉelkulturo supernatante, kaj histo homogenat supernatante.
Mempreparita Materials
RNase-liberaj pipetpintoj, 1.5 ml RNase-liberaj centrifugiltuboj, centrifugilo, vortico miksilo, kaj pipetoj.
Eksperimenta Procezo
Faru ĉiujn jenajn paŝojn en biosekureca kabineto.
1. Aldonu 200 μl de la specimeno al RNase-libera centrifugila tubo (konsistigi kun PBS aŭ 0,9% NaCl en kazo de nesufiĉa specimeno), aldonu 500 μl da Buffer VL, miksi bone per vortexing dum 15 – 30 sek, kaj centrifugi. mallonge kolekti la miksaĵon ĉe la fundo de la tubo.
2. Metu FastPure RNA-Kolumnojn en Kolektajn Tubojn 2 ml.Transloku la miksaĵon de Paŝo 1 al FastPure RNA-Kolumnoj, centrifugu je 12,000 rpm (13,400 × g) dum 1 min, kaj forĵetu la filtriton.
3. Aldonu 600 μl da Buffer RW al FastPure RNA-Kolumnoj, centrifugu je 12,000 rpm (13,400 × g) dum 30 sekundoj, kaj forĵetu la filtriton.
4. Ripetu Paŝon 3.
5. Centrifugu la malplenan kolonon je 12 000 rpm (13 400 × g) dum 2 min.
6. Zorge translokigu FastPure RNA-Kolumnojn en novan RNase-liberajn Kolektajn Tubojn 1.5 ml (provizitaj en la ilaro), kaj aldonu 30 – 50 μl da RNase-libera ddH2O al la centro de la membrano sen tuŝi la kolonon.Lasu stari ĉe ĉambra temperaturo dum 1 min kaj centrifugu je 12,000 rpm (13,400 × g) dum 1 min.
7. Forĵetu FastPure RNA-Kolumnojn.La DNA/RNA povas esti uzata rekte por postaj analizoj, aŭ konservita je -30 ~ -15 °C por mallonga periodo aŭ -85 ~ -65 °C dum pli longa periodo.
Notoj
Nur por esploruzo.Ne por uzo en diagnozaj proceduroj.
1. Ekvilibru specimenojn al ĉambra temperaturo anticipe.
2. Virusoj estas tre infektaj.Bonvolu certigi, ke ĉiuj necesaj sekurecaj antaŭzorgoj estas prenitaj antaŭ la eksperimento.
3. Evitu ripetan frostigon kaj degelon de la specimeno, ĉar ĉi tio povas konduki al degenero aŭ reduktita rendimento de la ĉerpita virusa DNA/RNA.
4. Mempreparita ekipaĵo inkluzivas RNase-liberajn pipetkonsiletojn, 1.5 ml RNase-liberajn centrifugiltubojn, centrifugilon, vortico-miksilon kaj pipetojn.
5. Kiam vi uzas la ilaron, portu laboratorian mantelon, foruzeblajn lateksajn gantojn kaj forĵeteblan maskon kaj uzu RNase-liberajn konsumaĵojn por minimumigi la riskon de RNase-poluado.
6. Faru ĉiujn paŝojn ĉe ĉambra temperaturo krom se alie specifita.
Mekanismo kaj Laborfluo
