RT-LAMP Kolormetrika Majstra Miksaĵo HCB5204A
Ĉi tiu produkto enhavas reakcian bufron, RT-Enzymes Mix (Bst DNA-polimerazo kaj varmorezista inversa transkriptazo), liofiligitaj Protektantoj kaj kromogenaj tinkturfarboj.Por uzi, simple uzu Buffer, la reagenzimo kaj enkonduko estas miksitaj kaj aldonitaj al la ŝablono;aldoni liofiligitan protektanton povas esti rekta.Ĝi estis konektita al liofiligilo kaj liofiligita, kaj nur la enkondukoj kaj ŝablonoj estis aldonitaj kiam uzite.Ĉi tiu ilaro disponigas rapidan, klaran vidan detekton de plifortigo, kiu negativa reago estas indikita en ruĝa kaj pozitiva reago estas indikita per ŝanĝo al flava.
Komponanto
| Komponanto | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Buklo-mediaciita Plifortiga Bufro (kun tinkturfarbo) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| Miksaĵo de RT-enzimoj | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Liofiligita protektanto | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Aplikoj
Por DNA aŭ RNA izoterma plifortigo.
Kondiĉoj de Stokado
Transportita per seka glacio, stokita ĉe -25 ~ -15 ℃.Evitu oftan frostig-degelon, la produkto validas dum 12 monatoj.
Protokolo
1.Degelu la reagbufron por esti uzata ĉe ĉambra temperaturo.Vortigu mallonge aŭ inversigu tubojn plurajn fojojn por miksi plene, tiam centrifugu por kolekti la likvaĵon al la fundo de la tubo.
2.Preparado de reagsistemo.Ĉi tiu reakciilo povas esti preparita en du reakciaj sistemoj, likva reakcia miksaĵo kaj liofiligita sistema miksaĵo.
1) Preparu likvan reakcian miksaĵon
| Komponanto | Volumo |
| Buklo-mediaciita Plifortiga Bufro (kun tinkturfarbo) | 10 μL |
| Miksaĵo de RT-enzimoj | 2,8 μL |
| 10 × Unua Miksaĵoa | 5 μL |
| Ŝablonoj DNA/ RNA b | × μL |
| Sennukleaza Akvo | Ĝis 50 μL |
2) Liofiligo-sistema miksaĵo
① Preparu liofiligitan miksaĵon
| Komponanto | Volumo |
| Buklo-mediaciita Plifortiga Bufro (kun tinkturfarbo) | 10 μL |
| Liofiligita protektanto | 20 μL |
| Miksaĵo de RT-enzimoj | 2,8 μL |
| Sennukleaza Akvo | Ĝis 50 μL |
② Liofiligo: La preta Miksaĵo estis liofiligita en 50μL-sistemo
③ Preparu reakcian miksaĵon
| Komponanto | Volumo |
| Liofiligita miksaĵo | 1 peco |
| 10 × Unua Miksaĵoa | 5 μL |
| Ŝablonoj DNA/ RNA b | × μL |
| Sennukleaza Akvo | Ĝis 50 μL |
Notoj:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Buklo F/B;
2) b.DEPC (akvosolvebla) estas rekomendita por nuklea acido templ.
1.Kovu je 65 °C dum 30-45 minutoj, kiu povas esti etendita taŭge laŭ kolorŝanĝo Reagtempo.
2.Laŭ la nuda okulo, flava estis pozitiva kaj ruĝa estis negativa.
Notoj
1.Salo povas aperi en la fundo de la bufrotubo, vortigi nelonge aŭ inversigi tubojn plurajn fojojn por miksi plene ĉe ĉambra temperaturo.
2.La reagtemperaturo povas esti optimumigita inter 62 ℃ kaj 68 ℃ laŭ la kondiĉo de enkondukoj.
3.La pakitaj reakciiloj ne devas esti elmontritaj al aero dum longa tempo.
4.La reago de ruĝa kaj flava senkoloriĝo dependas de la ŝanĝo de pH de la reagsistemo, bonvolu ne uzi la enhavan solvon de stokado de nuklea acido Tris, rekomendita uzi ddH.2O stokita nuklea acido;
5.La eksperimento devas esti normigita, inkluzive de la preparado de la reakcia sistemo, liofiligo, kaj specimena prilaborado kaj specimena aldona procezo;
6.Por eviti poluadon, oni rekomendas prepari la reagsistemon en ultra-pura benko, en aliaj Aldonu ŝablonojn al la fumkapuĉo de la ĉambro por eviti falsan pozitivan interferon.
