Musa Genotipada Ilaro

Kato-N-ro: HCR2021A

Ĉi tiu produkto estas ilaro dizajnita por la rapida identigo de musaj gentipoj, inkluzive de DNA-kruda eltiro kaj PCR-amplifiga sistemo.La produkto povas esti uzata por PCR-plifortigo rekte de musvosto, orelo, piedfingro kaj aliaj histoj post simpla fendiĝo de Lysis Buffer kaj Proteinase k.Neniu dumnokta digestado, fenol-kloroforma eltiro aŭ kolumna purigo, kio estas simpla kaj mallongigas la tempopostulon de eksperimentoj.La produkto taŭgas por plifortigo de celfragmentoj ĝis 2kb kaj multipleksaj PCR-reagoj kun ĝis 3 paroj da enkondukoj.La 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix enhavas genetike realigitan DNA-polimerazon, Mg²⁺, dNTPoj kaj optimumigita bufrosistemo por disponigi altan plifortigan efikecon kaj inhibitoran toleremon, tiel ke PCR-reagoj povas esti aranĝitaj aldonante ŝablonon kaj enkondukojn kaj rehidratigante la produkton al 1×.La PCR-produkto plifortigita kun ĉi tiu produkto havas elstaran "A" bazon ĉe la 3′ fino kaj povas esti uzata rekte por TA-klonado post purigado.

Komponentoj

Kondiĉoj de Stokado

Produktoj devas esti konservitaj je -25 ~ -15 ℃ dum 2 jaroj.Post degelo, Lysis Buffer povas esti stokita je 2~8℃ por mallongdaŭra multobla uzo, kaj miksi bone dum uzo.

Apliko

Ĉi tiu produkto taŭgas por musa knokaŭta analizo, transgena detekto, genotipado ktp.

Trajtoj

1.Simpla operacio: ne necesas ĉerpi genoman DNA;

2.Larĝa apliko: taŭga por rekta plifortigo de diversaj musaj histoj.

Instrukcioj

1.Liberigo de genoma DNA

1) Preparado de lisato

La hista lisato estas preparita laŭ la nombro da musaj specimenoj por esti lizita (histo lisato devas esti preparita surloke laŭ la dozo kaj ĝisfunde miksita por uzo), kaj la proporcio de reakciiloj necesaj por ununura specimeno estas jena:

2) Specimena Preparado kaj Lizo

Rekomendita Histo-Uzo

Prenu taŭgan kvanton da mushistospecimenoj en puraj centrifugilaj tuboj, aldonu 200μL da freŝa hista lisato al ĉiu centrifugiltubo, vortu kaj skuu, poste kovu je 55℃ dum 30min, kaj poste varmigu je 98℃ dum 3min.

3) Centrifigado

Skuu la lizaton bone kaj centrifugu je 12,000 rpm dum 5 minutoj.La supernatanto povas esti utiligita kiel ŝablono por PCR-plifortigo.Se la ŝablono estas necesa por stokado, translokigu la supernatanton al alia sterila centrifugila tubo kaj konservu je -20 ℃ dum 2 semajnoj.

2.PCR Plifortigo

Forigu la 2×Muse Tissue Direct PCR Mix de -20℃ kaj degelu sur glacio, miksu renverse kaj preparu la PCR-reagan sistemon laŭ la sekva tabelo (funkciu sur glacio):

Notu:

a) La kvanto aldonita ne devus superi 1/10 de la sistemo, kaj se tro multe estas aldonita, PCR-plifortigo povas esti malhelpita.

Rekomenditaj PCR-Kondiĉoj

Notu:

a) Kuracia temperaturo: Rilate al la Tm-valoro de la enkonduko, oni rekomendas agordi la kalcigan temperaturon al la pli malgranda Tm-valoro de la enkonduko +3~5℃.

Oftaj Problemoj kaj Solvoj

1.Neniuj celitaj strioj

1) Troa liza produkto.Elektu la plej taŭgan kvanton da ŝablono, kutime ne pli ol 1/10 de la sistemo;

2) Tro granda specimena grandeco.Diluu la lizaton 10 fojojn kaj poste plifortigu, aŭ reduktu la specimenan grandecon kaj re-lizon;

3) Specimenoj de histo ne estas freŝaj.Oni rekomendas uzi freŝajn histajn specimenojn;

4) Malbona unua kvalito.Uzu genoman DNA por plifortigo por kontroli la enkondukan kvaliton kaj optimumigi la enkondukan dezajnon.

2.Nespecifa plifortigo

1) La kalcia temperaturo estas tro malalta kaj la cikla nombro estas tro alta.Pliigi la tempan temperaturon kaj redukti la nombron da cikloj;

2) Ŝablona koncentriĝo estas tro alta.Reduktu la kvanton da ŝablono aŭ diluu la ŝablonon 10 fojojn post plifortigo;

3) Malbona primer-specifeco.Optimumigu la komencan dezajnon.

Notoj

1.Por eviti krucan poluadon inter specimenoj, oni devas prepari plurajn specimenajn ilojn, kaj la surfaco de la iloj povas esti purigita per 2% natria hipoklorita solvaĵo aŭ nuklea acida purigilo post ĉiu specimeno se ripetita uzo estas postulata.

2.Oni rekomendas uzi freŝajn musajn histojn, kaj la specimena volumo ne estu tro granda por eviti influi la plifortigajn rezultojn.

3.Lysis Buffer devus eviti oftan frosto-degelon, kaj povas esti stokita je 2~8℃ por mallongdaŭra multobla uzo.Se stokita ĉe malalta temperaturo, precipitaĵo povas okazi, kaj devas esti plene solvita antaŭ uzo.

4.PCR-Miksaĵo devus eviti oftan frostigo-degelon, kaj povas esti stokita je 4℃ por mallongdaŭra ripeta uzo.

5.Ĉi tiu produkto estas nur por scienca eksperimenta esplorado kaj ne devus esti uzata en klinika diagnozo aŭ kuracado.