DNase I (Rnase Libera) (5u/ul)
Kato-N-ro: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) estas endodeoksirribonukleazo kiu povas digesti unu- aŭ duoble-fadenan DNA.Ĝi rekonas kaj fendas fosfodiesterajn ligojn por produkti monodeoksinucleotidojn aŭ unu- aŭ duoble-fadenajn oligodeoksinucleotidojn kun fosfatgrupoj ĉe la 5'-finaĵo kaj hidroksilo ĉe la 3'-finaĵo.La agado de DNazo I dependas de Ca2+kaj povas esti aktivigita per divalentaj metaljonoj kiel ekzemple Mn2+kaj Zn2+.5 mM Ca2+protektas la enzimon kontraŭ hidrolizo.En la ĉeesto de Mg2+, la enzimo povis hazarde rekoni kaj fendi ajnan ejon sur iu fadeno de DNA.En la ĉeesto de Mn2+, la duoblaj fadenoj de DNA povas esti samtempe rekonitaj kaj fenditaj ĉe preskaŭ la sama loko por formi platfinajn DNA-fragmentojn aŭ gluiĝemajn finajn DNA-fragmentojn kun 1-2 nukleotidoj elstarantaj.
Komponentoj
| Nomo | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNazo-libera | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Kondiĉoj de konservado
-25 ℃ ~ -15 ℃ por stokado;Transportado sub glaciaj pakoj.
Instrukcioj
1. Preparu la reakcian solvon en la RNase-libera tubo laŭ la proporcioj listigitaj sube:
| Komponanto | Volumo |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNazo I, RNazo-libera (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Ĝis 10μL |
Noto: ①Kalkulu la volumenon de DNase I kiu devas esti aldonita surbaze de la kvanto de RNA.
2. 37 ℃ dum 15 minutoj;
3. Aldonu 0.5M EDTA al la fina koncentriĝo de 2.5mM~5mM, kaj varmigu je 65℃ dum 10 minutoj por ĉesigi la reagon.La provaĵo povas esti rekte uzata por la sekva reago kiel inversa transskriboeksperimento.
Unueca Difino
Unu unuo estas difinita kiel la kvanto de enzimo kiu tute degradas 1µg de pBR322DNA en 10 minutoj je 37℃.
Kontrolo de kvalito
RNazo:5U de DNase I kun 1.6µg MS2 RNA dum 4 horoj je 37℃ donas neniun degeneron ĉardeterminite per agaroseĝelektroforezo.
Notoj
1. Bonvolu prepari 0.5MEDTA per vi mem.
2. Uzu 1U DNase I per µg da RNA.Tamen, se la RNA estas malpli ol 1µg, bonvolu uzi 1U DNase I.
3. Bonvolu meti la enzimon sur glacion dum operacio.
