Bst 2.0 DNA-polimerazo (sen glicerino)
Bst DNA-polimerazo V2 estas derivita de Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, kiu havas 5′→3′ DNA-polimerazan agadon kaj fortan ĉenan anstataŭigan agadon, sed neniun 5′→3′ eksonukleazaktivecon.Bst DNA Polymerase V2 estas ideale taŭga por faden-delokiĝo, izoterma amplifigado LAMP (Loop mediated izoterma amplificado) kaj rapida sekvencado.
Komponentoj
| Komponanto | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerazo V2 (senglicerino) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Bufro | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplikoj
1.LAMP izoterma plifortigo
2.DNA fadeno ununura movo reago
3.Alta GC-gensekvencado
4.DNA-sekvencado de nanograma nivelo.
Kondiĉo de Stokado
Transportado sub 0 °C kaj stokita je -25 °C ~ -15 °C.
Unueca Difino
Unu unuo estas difinita kiel la kvanto de enzimo kiu korpigas 25 nmol de dNTP en acidan nesolveblan materialon en 30 minutoj je 65 °C.
Kontrolo de kvalito
1.Testo pri Proteina Pureco (SDS-PAGE):La pureco de Bst DNA-polimerazo V2 estas ≥99% determinita per SDS-PAGE-analizo uzanta Coomassie Blue-detekto.
2.Eksonuclease-Agado:Kovado de 50 μL reago enhavanta minimumon de 8 U de Bst DNA-polimerazo V2 kun 1 μg λ -Hind Ⅲ digesta DNA dum 16 horoj je 37 ℃ rezultigas neniun konstateblan degeneron kiel determinite.
3.Nickase-Agado:Kovado de 50 μL reago enhavanta minimumon de 8 U de Bst DNA-polimerazo V2 kun 1 μg pBR322 DNA dum 16 horoj je 37 °C rezultigas neniun konstateblan degeneron kiel determinite.
4.RNase-Agado:Kovado de 50 μL reago enhavanta minimumon de 8 U de Bst DNA-polimerazo V2 kun 1.6 μg MS2 RNA dum 16 horoj je 37 °C rezultigas neniun konstateblan degeneron kiel determinite.
5.DNA de E. coli:120 U de Bst DNA-polimerazo V2 estas ekzamenitaj por la ĉeesto de E. coli genomic DNA uzante TaqMan qPCR kun enkondukoj specifa por la E. coli 16S rRNA-lokuso.La E. coli genoma DNA-poluado estas ≤1 Kopio.
LAMPA Reago
| Komponentoj | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Bufro | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP-oj (10 mM ĉiu) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Verda (25×)a | 1,0 μL |
| Unua miksaĵob | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (senglicerino) (8 U/uL) | 1 μL |
| Ŝablono | × μL |
| ddH₂O | Ĝis 25 μL |
Notoj:
1) a.SYTOTM 16 Verda (25×): Laŭ eksperimentaj bezonoj, aliaj tinkturfarboj povas esti uzataj kiel anstataŭaĵoj;
2) b.Primer-miksaĵo: akirita per miksado de 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB kaj aliaj volumoj.
Reago kaj Kondiĉo
1 × HC Bst V2 Buffer, la inkubacia temperaturo estas inter 60 °C kaj 65 °C.
Malaktivigo de Varmo
80 °C, 20 minutoj
