5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Kato-N-ro: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) estas tre stabila unu-tuba enket-bazita miksaĵo taŭga por unupaŝa inversa transskribo kaj kvanta PCR (qRT-PCR).Ĝi subtenas antaŭmiksadon de enkondukoj kaj sondiloj kaj restas stabila post longa tempo konservado ĉe malalta temperaturo.La provita specimeno povas esti aldonita rekte kiam oni uzas, sen plia tubo malfermo/pipetado.Ĉi tiu produkto provizas komponantojn, ekz. varm-komenca DNA-polimerazo, M-MLV, varmo-labila uracil DNA-glikozilazo (TS-UNG), RNazo-Inhibitoro, MgCl2, dNTPoj (kun dUTP anstataŭe de dTTP), kaj stabiligiloj.Kun la genetike modifita rapida plifortiga inversa transkriptazo kaj DNA-polimerazo, estas eble kompletigi la PCR-plifortigon ene de 20-40 minutoj.Tiu reakciilo uzas specialan bufron por qPCR kun miksitaj enzimoj de kontraŭ-inhiba plifortiga enzimo kaj UNG-enzimo.Tial ĝi povas akiri bonan plifortigon de celgenoj kaj malhelpi falsan plifortigon kaŭzitan de PCR-restanta kaj aerosolpoluado.Ĉi tiu reakciilo estas kongrua kun la plej multaj fluoreskecaj kvantaj PCR-instrumentoj de produktantoj kiel ekzemple Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad kaj Roche.
Komponanto
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Kondiĉoj de Stokado
Ĉiuj komponantoj devas esti konservitaj je -20 ℃ por longtempa konservado kaj 4 ℃ dum ĝis 3 monatoj.Bonvolu miksi plene post degelo kaj centrifugi antaŭ ol uzi.Evitu oftan frostig-degelon.
qRT-PCR-Reaga Sistemo-Preparo
| Komponentoj | 25μLSistemo | 50μLSistemo | Fina Koncentriĝo |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| Ŝablono RNAb | – | – | – |
| ddH2O | Ĝis 25μL | Ĝis 50μL | – |
1) a.La fina koncentriĝo de primero estas kutime 0.2μM.Por pli bonaj rezultoj, la unua koncentriĝo povas esti optimumigita en la intervalo de 0.2-1μM.Ĝenerale, la sonda koncentriĝo povas esti optimumigita ene de la intervalo de 0.1-0.3μM.
2) b.Kiam oni uzas rapidan PCR-Proceduron, pliigi la koncentriĝon de enkondukoj kaj enketoj povas rezultigi pli bonajn plifortigajn rezultojn, kaj ilia proporcio devas esti optimumigita laŭe.
3) Malsamaj specoj de specimenoj enhavas malsamajn specojn kaj enhavon de inhibitoro kaj kopinombron de cela geno.La specimena volumo devas esti konsiderata laŭ reala kondiĉo.Faru diluon de la specimeno per sennukleaza akvo aŭ TE Buffer, se necese.
Reago Ckondiĉoj
| Regula PCR-Procedo | Rapida PCR-Procedo | ||||||
| Proceduro | Temp. | Tempo | Ciklo | Proceduro | Temp. | Tempo | Ciklo |
| Inversa Transskribo | 50℃ | 10-20 minutoj | 1 | Inversa Transskribo | 50℃ | 5 minutoj | 1 |
| Polimerazo Aktivigo | 95℃ | 1-5 minutoj | 1 | Polimerazo Aktivigo | 95℃ | 30-aj jaroj | 1 |
| Denaturado | 95℃ | 10-20-aj jaroj | 40-50 | Denaturado | 95℃ | 1-3s | 40-50 |
| Kolekti kaj Etendo | 56-64℃ | 20-60-aj jaroj | Kolekti kaj Etendo | 56-64℃ | 3-20-aj jaroj | ||
Kontrolo de kvalito
1.Funkcia detekto: sentemo, specifeco kaj ripeteblo de qPCR.
2.Neniu eksogena nukleazo-agado: neniu eksogena endonukleazo kaj eksogena nukleazo-poluo.
Notoj
1.Plifortigo de rapida DNA-polimerazo estas ne malpli ol 1kb/10s.Malsamaj PCR-instrumentoj havas malsamajn hejtajn kaj malvarmigajn rapidojn, temperaturregilojn kaj termikan konduktivecon, kaj tiel optimumigo de via unua/sonda koncentriĝo kaj kurado-metodo en kombinaĵo kun via specifa rapida PCR-instrumento estas esenca.
2.Ĉi tiu produkto plenumas larĝan aplikeblecon, kaj ĝi taŭgas por alt-sentema molekula diagnozo.Tri-ŝtupa PCR-metodo estas rekomendita por enkondukoj kun malalta kalcia temperaturo aŭ por plifortigo de longaj fragmentoj pli ol 200 bp.
3.Ĉar malsamaj amplikonoj havas malsaman utiligan efikecon de dUTP kaj malsaman sentemon al UNG, la reakciiloj devus esti optimumigitaj se la deteksentemo malpliiĝas dum uzado de UNG-sistemo.Bonvolu kontakti nin por teknika subteno se necese.
4.Por eviti plifortigon de reportaj PCR-produktoj, diligenta eksperimenta areo kaj pipeto estas postulataj por plifortigo.Funkcii per gantoj kaj ŝanĝi ofte kaj ne malfermu la PCR-tubon post plifortigo.
