UDG/UNG Enzimoj
UDG (uracil DNA-glikozilazo) povas katalizi la hidrolizon de la N-glikozida ligo inter la uracila bazo kaj la sukerfosfata spino en ssDNA kaj dsDNA.Ĝi povas facile kontroli aerosolan poluadon kaj taŭgas por komunaj molekulaj biologiaj sistemoj kiel PCR, qPCR, RT-qPCR kaj LAMP.
Specifoj
| Esprimo Gastiganto | Rekombina E. coli kun uracil DNA-glikozilaza geno |
| Molekula pezo | 24. 8kDa |
| Pureco | ≥95% (SDS-PAĜO) |
| Malaktivigo de Varmo | 95℃, 5~10 min |
| Unueca Difino | Unu unuo (U) estas difinita kiel la kvanto de enzimo kiu postulis por katalizi la hidrolizon de l μg dU-enhavanta dsDNA en 30 minutoj je 25℃. |
Stokado
La produkto devas esti konservita je -25 ℃ ~ -15 ° C dum du jaroj.
Instrukcioj
1.Preparado de la PCR-reaga miksaĵo laŭ la sekva sistemo
| Komponentoj | Volumo (μL) | Fina koncentriĝo |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Leach |
| Ŝablono DNA | X | - |
| Enkonduko 1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Enkonduko 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA-polimerazo (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Ĝis 50 | - |
Notu: Laŭ la eksperimentaj postuloj, la fina koncentriĝo de dUTP povas esti ĝustigita inter 0,2-0,6 mmol/L, kaj 0,2 mmol/L dTTP povas esti aldonita selekteme.
2.Plifortiga proceduro
| Cikla paŝo | Temperaturo | Tempo | Cikloj |
| dU-enhavanta ŝablono-degenero | 25℃ | 10 minutoj | 1 |
| UDG-aktivigo, ŝablono komenca denaturigo | 95℃ | 5 ~ 10 minutoj | 1 |
| Denaturado | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Kolekti | 60℃ | 20 sek | |
| Etendo | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Fina etendo | 72℃ | 5 min | 1 |
Notu: La reagtempo ĉe 25 °C povas esti ĝustigita ene de 5-10 minutoj laŭ la eksperimentaj postuloj.
Notoj
1.UDG estas aktiva en la plej multaj PCR-reagbufroj.
2.Enzimoj devas esti stokitaj en glaciujo aŭ sur glacia bano kiam ili estas uzataj, kaj devas esti konservitaj je -20 °C tuj post uzo.
3.Bonvolu porti la necesan PPE, tiajn laboratoriomantelon kaj gantojn, por certigi vian sanon kaj sekurecon!
