Ultra Nukleazo
UltraNuclease estas genetike inĝenierita denuklazo derivita de Serratia marcescens, kiu kapablas degradi DNA aŭ RNA, aŭ duoble aŭ unu-fadenan, linia aŭ cirkla sub larĝa gamo de kondiĉo, tute degradas nukleajn acidojn en 5'-monofosfatajn oligonukleotidojn kun 3-5 bazlongo. .Post modifo de genetika inĝenierado, la produkto estis fermentita, esprimita kaj purigita en Escherichia coli (E. coli), kiu reduktas la viskozecon de ĉela supernatante kaj ĉellysate nescienca esplorado, sed ankaŭ plibonigas la purigan efikecon kaj funkcian esploradon de proteino.Ĝi ankaŭ povas esti uzata en la genterapio, viruspurigo, vakcina produktado, proteina kaj polisakarida farmacia industrio kiel gastiga reakciilo por forigo de nukleacidaj restaĵoj.
Produktaj trajtoj
| CAS No. | 9025-65-4 |
| EC No. | |
| Molekula pezo | 30 kDa |
| Izoelektra Punkto | 6.85 |
| Proteina Pureco | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Specifa Agado | ≥1.1×106U/mg |
| Optimuma Temperaturo | 37°C |
| Optimuma pH | 8.0 |
| Protease-Agado | negativa |
| Bioŝarĝo | ＜10CFU/100,000U |
| Resta Gastiĉela Proteino | ≤10ppm |
| Peza metalo | ≤10ppm |
| Bakteria Endotoksino | ＜0.25EU/1000U |
| Stokado Buffer | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2 ， 20mM NaCl, 50% Glicerolo |
Kondiĉoj de konservado
≤0°C transportado; -25~-15°C Stokado, valideco de 2 jaroj (evitu frostigo-degelon).
Unueca Difino
La kvanto de enzimo uzita por ŝanĝi la sorbadvaloron de △A260 je 1.0 ene de 30min je 37 °C, pH 8.0, ekvivalenta al digestita 37μg salmsperma DNA per tranĉado en oligonukleotidojn, estis difinita kiel aktiva unuo (U).
Kontrolo de kvalito
Resta Gastiĉela Proteino: ELISA ilaro
•Proteazo Restaĵoj: 250KU/mL UltraNuclease reagis kun substrato dum 60min, neniu aktiveco estis detektita.
•Bakteria Endotoksino: LAL-Testo, Farmakopeo de la Ĉina Popola Respubliko Volumo 4 (2020 Eldono) ĝela limo-testmetodo.Ĝeneralaj Reguloj (1143).
•Bioŝarĝo: Farmakopeo de la Ĉina Popola Respubliko Volumo 4 (2020 Eldono)— Ĝenerala
Reguloj por Sterility Test (1101), PRC Nacia Normo, GB 4789.2-2016.
•Peza metalo:ICP-AES, HJ776-2015.
Operacio
UltraNuclease-agado estis signife malhelpita kiam SDS-koncentriĝo estis pli ol 0.1% aŭ EDTA
koncentriĝo estis pli ol 1mM.Surfactant Triton X-100, Tween 20 kaj Tween 80 havis neniun efikon al nukleazo
propraĵoj kiam la koncentriĝo estis sub 1.5%.
| Operacio | Optimuma Operacio | Valida Operacio |
| Temperaturo | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| TDT | 0-100mM | > 100 mM |
| 2-Merkaptoetanolo | 0-100mM | > 100 mM |
| Monovalenta metala jono (Na+, K+ ktp.) | 0-20mM | 0-200mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100mM |
Uzado kaj Dozo
• Forigu eksogenan nuklean acidon de vakcinaj produktoj, reduktu la riskon de resta nukleacida tokseco kaj plibonigu produktan sekurecon.
• Redukti la viskozecon de nutra likvaĵo kaŭzita de nuklea acido, mallongigi pretigan tempon kaj pliigi proteinan rendimenton.
• Forigi la nuklean acidon kiu envolvis partiklon (viruso, inkludo korpo, ktp), kiu estas favora
al la liberigo kaj purigo de la partiklo.
| Eksperimenta Tipo | Proteina Produktado | Viruso, Vakcino | Ĉelaj Drogoj |
| Ĉeloj Nombro | 1 g ĉelo malseka pezo (resuspendite kun 10ml bufro) | 1L fermentado likva supernatante | 1L kulturo |
| Minimuma Dozo | 250U | 100U | 100U |
| Rekomendita Dozo | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nuclease-traktado povas plibonigi la rezolucion kaj reakiron de la specimeno por kolumna kromatografio, elektroforezo kaj blotting-analizo.
• En genterapio, nuklea acido estas forigita por akiri purigitajn adeno-rilatajn virusojn.
