Temperaturo-Sentema UNG
Temperatura Sensitiva UNG (TS-UNG) estas akirita per rekombina esprimo en E. coli.La enzimo katalizas la liberigon de libera uracilo de uracil-enhavanta unu- kaj duoble-fadena DNA kaj estas neaktiva kontraŭ RNA.Kompare kun la konvencia UNG-enzimo de E. coli gena origino, TS-UNG-enzimo havas pli altan agadon ĉe malaltaj temperaturoj (20 ℃ ~ 37 ℃) kaj estas temperaturo sentema kaj facile malaktivigita (50 ℃), evitante la degeneron de dUTP-enhava plifortigo. produktoj ĉe ĉambra temperaturo per la resta agado kiu povas resti post malaktivigo de la konvencia UNG-enzimo.Tial, TS-UNG-enzimo ne nur taŭgas por PCR-poluada preventa reago, sed ankaŭ kongruas bone kun la RT-PCR-amplifiga programo kaj povas esti uzata en RT-PCR-poluada preventa reago.
Rekomendita Apliko
Poluado Preventado Amplifiĝo
Kondiĉo de Stokado
-20 °C por longtempa konservado, devus esti bone miksita antaŭ uzo, evitu oftan frosto-degelon.
Stokado bufro
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabiligilo, 50% Glicerolo.
Unueca Difino
La kvanto de enzimo necesa por degradi 1µg da unu-fadena DNA enhavanta dU-bazojn en 1 horo je 37 °C estas 1 unuo de agado (U).
Kontrolo de kvalito
1.SDS-PAGE elektroforeta pureco pli granda ol 98%
2.Degrada agado, bat-al-loka kontrolo, stabileco
3.Neniu eksogena nukleazo-agado, neniu eksogena endonukleazo aŭ eksogena nukleazo poluado.
Instrukcioj
| Komponentoj | Volumo (μL) | Fina koncentriĝo |
| 10 × PCR Buffer (dNTP senpaga, Mg²+senpaga) | 5 | 1× |
| dUTPoj (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (anstataŭigi dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Unua Miksaĵoa | 2 | 1× |
| Ŝablono | - | ＜1μg/reago |
| ddH₂O | Al 50 | - |
Notu: a: Se uzata por qPCR/qRT-PCR, la fluoreska sondilo devus esti aldonita en la reagsistemon.Kutime, fina primerkoncentriĝo de 0.2 μM povas doni bonajn rezultojn;kiam la reago agado estas malbona, la unua koncentriĝo povas esti ĝustigita en la gamo de 0.2-1 μM.Kutime, la sonda koncentriĝo estas optimumigita en la intervalo de 0.1-0.3 μM.Eksperimentoj pri koncentriĝgradiento povas esti faritaj por trovi la plej bonan kombinaĵon de enkonduko kaj sondilo.
Notoj
1.La optimuma reagtemperaturo de TS-UNG-enzimo estas relative malalta, kaj ĝi povas esti optimumigita en la intervalo de 20 ℃ ~ 37 ℃, la dozo de enzimo kaj la reagtempo povas esti optimumigita en la intervalo de 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;kaj la enzimo povas esti inaktivigita en la procezo de inversa transskribo.
2.Ĝi taŭgas por PCR kaj RT-PCR por malhelpi poluadon.
3.Evitu oftan frosto-degelon, kaj ne eksponu al grandaj temperaturfluktuoj.
4.Malsamaj genoj ampligotaj havas malsaman utiligan efikecon de dUTP kaj sentemon al UNG-enzimo, tial, se la uzo de UNG-sistemo kondukas al malpliigo de detekta sentemo, la reagsistemo devas esti ĝustigita kaj optimumigita, se vi bezonas teknikan subtenon, bonvolu kontakti nia kompanio.
