M-MLV Inversa Transskribazo
RevScript Inversa transkriptazo estas akirita per genetika teknologio.Ĝi havas pli altan cDNA-sintezkapablon, termikan stabilecon kaj reagtemperaturlimon (ĝis 60 °C).La sintezita cDNA-produkto estas ĝis 10 kb.Ĝi plibonigas la afinecon de la ŝablonoj kaj taŭgas por inversa transskribo de RNA-ŝablonoj kun kompleksa sekundara strukturo aŭ malaltaj kopigenoj.
Komponentoj
| Komponanto | HC2003B (10,000U) | HC2003B (5*10,000U) | HC2003B (200,000U) |
| RevScript Inversa Transkriptazo (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 ml |
| 5 × RevScript Buffer | 250 μL | 1,25 ml | 5 ml |
Kondiĉo de Stokado
Ĉi tiu produkto devas esti konservita je -25 °C ~ -15 °C dum 2 jaroj.
Unueca Difino
Unu unuo korpigas 1 nmol de dTTP en acid-nesolveblan materialon en 10 minutoj je 37 °C uzante Oligo (dT) kiel enkondukojn.
Reago-Agordo
1.Denaturigo de RNA-ŝablono (Ĉi tiu paŝo estas laŭvola, denaturigo de RNA-ŝablono helpas malfermi la sekundarajn strukturojn, kiuj plibonigos la rendimenton de la unua fadeno cDNA. )
| Komponentoj | Volumo (μL) |
| RNazo libera ddH2O | Al 13 |
| Oligo (dT)18 (50 μmol/L) aŭ Hazarda Enkonduko (50 μmol/L) Aŭ Genaj Specifaj Enkondukoj (2 μmol/L) | 1 |
| aŭ 1 | |
| aŭ 1 | |
| RNA ŝablono | X a |
Notoj:
1) a: Tuta RNA: 1-5 ug aŭ mRNA: 1-500 ng
2) Kovado je 65 °C dum 5 minutoj, poste transdonante sur glacio tuj por malvarmigi dum 2 minutoj.Mallonga centrifugado por kolekti reagan likvaĵon, aldonu la inversan transskriban reagsolvon kiel montrite en la sekva tabelo.Pipetu milde por miksi.
1.Preparado de la reakcia miksaĵo (20 μL-volumo)
| Komponentoj | Volumo (μL) |
| Miksaĵo de antaŭa paŝo | 13 |
| 5×Bufro | 4 |
| dNTP-Miksaĵo (10 nmol/L) | 1 |
| Inversa transkriptazo (200 U/μL) | 1 |
| RNase-inhibitoro (40 U/μL) | 1 |
1.Faru la reagon en la sekvaj kondiĉoj:
| Temperaturo (°C) | Tempo |
| 25 °Ca | 5 minutoj |
| 42 °Cb | 15-30 minutoj |
| 85 °Cc | 5 minutoj |
Notoj:
1) a.Kovado je 25 °C dum 5 minutoj estas bezonata nur por uzi la hazardajn heksamerojn.Bonvolu preterlasi ĉi tiun paŝon kiam vi uzas Oligo (dT)18aŭ Gene Specific Primer.
2) b.La rekomendita inversa transskriba temperaturo estas 42 °C, Por ŝablonoj kun komplikaj malĉefaj strukturoj aŭ alta GC-enhavo, oni rekomendas altigi la reagtemperaturon al 50-55 °C.
3) ĉ.Varmigi je 85 °C dum 5 minutoj por malaktivigi inversan transskribazon.
4) La produkto povas esti rekte uzata en PCR aŭ qPCR-reagoj, aŭ konservita ĉe -20 °C por mallongdaŭra stokado.Oni rekomendas aligu la produktojn kaj stoki je -80 °C por longdaŭra konservado.Evitu oftan frostig-degelon.
5) La produkto taŭgas por unupaŝa RT-qPCR, oni rekomendas aldoni 10-20 U inversan transkriptazon por ĉiu 25μL reag sistemo, aŭ iom post iom pliigi la kvanton de inversa transcriptase laŭ la reala situacio.
Notoj
1.Bonvolu konservi la eksperimentan areon pura;Puraj gantoj kaj maskoj devas esti portitaj dum operacio.Ĉiuj konsumaĵoj uzataj en la eksperimento devas esti liberaj de RNase por malhelpi RNase-poluadon.
2.Ĉiuj proceduroj devas esti faritaj sur glacio por malhelpi RNA-degeneron.
3.Altkvalitaj RNA-provaĵoj estas rekomenditaj por certigi altan efikecon de inversa transskribo.
4.Ĉi tiu produkto estas nur por esploruzo.
5.Bonvolu operacii kun laboratoriaj manteloj kaj forĵeteblaj gantoj, por via sekureco.
