DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) estas endodeoksirribonukleazo kiu povas digesti unu- aŭ duoble-fadenan DNA.Ĝi rekonas kaj fendas fosfodiesterajn ligojn por produkti monodeoksinucleotidojn aŭ unu- aŭ duoble-fadenajn oligodeoksinucleotidojn kun fosfatgrupoj ĉe la 5′-finaĵo kaj hidroksilo ĉe la 3′-terminalo.La agado de DNase I dependas de Ca2+ kaj povas esti aktivigita per divalentaj metaljonoj kiel ekzemple Mn2+ kaj Zn2+.5mM Ca2+ protektas la enzimon kontraŭ hidrolizo.En la ĉeesto de Mg2+, la enzimo povis hazarde rekoni kaj fendi ajnan ejon sur iu fadeno de DNA.En la ĉeesto de Mn2+, la duoblaj fadenoj de DNA povas esti samtempe rekonitaj kaj fenditaj ĉe preskaŭ la sama loko por formi platfinajn DNA-fragmentojn aŭ gluiĝemajn finajn DNA-fragmentojn kun 1-2 nukleotidoj elstarantaj.
Produkta Proprieto
Bova Pankreata DNase I estis esprimita en gista esprimo sistemo kaj purigita.
Ckomponantoj
| Komponanto | Volumo | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNazo-libera | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transportado kaj Stokado
1. Stokado-Stabileco: - 15℃~-25℃ por stokado;
2.Transporta Stabileco: Transportado sub glaciaj pakoj;
3. Liveritaj en: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glicerolo, pH 7.6 ĉe 25℃.
Unueca Difino
Unu unuo estas difinita kiel la kvanto de enzimo kiu tute degradas 1 µg da pBR322 DNA en 10 minutoj je 37 °C.
Kontrolo de kvalito
RNazo:5U de DNase I kun 1.6 μg MS2 RNA dum 4 horoj je 37 ℃ donas neniun degeneron kiel determinite per agarose-ĝelelektroforezo.
Bakteria Endotoksino:LAL-testo, laŭ Ĉina Farmakopeo IV 2020 eldono, ĝela limo-testmetodo, ĝenerala regulo (1143).La enhavo de bakteria endotoksino devas esti ≤10 EU/mg.
Instrukcioj por Uzo
1. Preparu la reakcian solvon en la RNase-libera tubo laŭ la proporcioj listigitaj sube:
| Komponanto | Volumo |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNazo I, RNazo-libera (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Ĝis 10 μL |
2,37 ℃ dum 15 minutoj;
3.Aldonu la finbufferon por ĉesigi la reagon, kaj varmigu je 65℃ dum 10 minutoj por malaktivigi DNase I. La specimeno povas esti rekte uzata por la sekva transskriba eksperimento.
Notoj
1.Uzu 1U DNase I per μg da RNA, aŭ 1U DNase I por malpli ol 1μg da RNA.
2.EDTA devus esti aldonita al fina koncentriĝo de 5 mM por protekti RNA de esti degradita dum enzima malaktivigo.
