CHO HCP ELISA Ilaro
Unupaŝa imunsorbenta ELISA metodo estas uzata en ĉi tiu analizo.Provaĵoj enhavantaj CHOK1 HCP samtempe reagas kun HRP-etikedita kapra kontraŭ-CHOK1-antikorpo kaj kontraŭ-CHOK1-antikorpo kovrita sur la ELISA-plato, finfine formante sandviĉkomplekson de solid-faza antikorpo-HCP-etikedita antikorpo.Neligita antigeno-antikorpo povas esti forigita per lavado de la ELISA-plato.La TMB-substrato estas aldonita al la puto por sufiĉa reago.La kolordisvolviĝo estas ĉesigita post aldonado de la halta solvo, kaj la OD aŭ absorba valoro de la reagsolvo ĉe 450/650nm estas legita per mikroplata leganto.La OD-valoro aŭ absorbadvaloro estas proporcia al la HCP-enhavo en la solvo.El tio, la HCP-koncentriĝo en la solvaĵo povas esti kalkulita laŭ la norma kurbo.
Apliko
Ĉi tiu ilaro estas uzata por kvante detekti la enhavon de CHOK1-gastĉelaj proteinrestaĵoj en specimenoj.
Ckomponantoj
| S/N | Komponanto | Koncentriĝo | Kondiĉoj de Stokado |
| 1 | CHOK1 HCP-Normo | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Kontraŭ-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, protektu kontraŭ lumo |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, protektu kontraŭ lumo |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Haltiga solvo | NA | RT |
| 6 | Mikroplataj sigeliloj | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Alta adsorbado antaŭ-tegaĵo Platoj | NA | 2-8 ℃ |
Ekipaĵo Bezonata
| Konsumeblaj / Ekipaĵoj | Fabrikado | Katalogo |
| Mikroplatleganto | Molekulaj aparatoj | Spectra Max M5, M5e aŭ ekvivalento |
| Termomiksilo | Eppendorf | Eppendorf/5355, aŭ ekvivalento |
| Vortica miksilo | IKA | MS3 Cifereca, aŭ ekvivalento |
Stokado kaj stabileco
1.Transportu je -25 ~ -15 °C.
2.Kondiĉoj de konservado estas kiel montritaj en Tabelo 1;komponantoj 1-2 estas stokitaj ≤–20 °C, 5-6 estas stokitaj RT, 3、4、7、8 estas stokitaj je 2-8℃;la valideca periodo estas 12 monatoj.
Produktaj parametroj
1.Sentemo: 1ng/mL
2.Detekta gamo: 3-100ng/mL
3.Precizeco: intra-analiza CV≤ 10%, inter-analiza CV≤ 15%
4.HCP-kovrado: >80%
5.Specifeco: Ĉi tiu ilaro estas universala ĉar ĝi specife reagas kun CHOK1 HCP sendepende de puriga procezo.
Preparado de reakciiloj
1.PBST 0.05%
Prenu 15 ml da 20×PBST 0,05%, diluitaj en ddH2O, kaj faris ĝis 300 ml.
2.1.0% BSA
Prenu 1 g da BSA el la botelo kaj diluu en 100 ml da PBST 0,05%, miksu bone ĝis tute solvita, kaj konservu je 2-8 °C.La preta dilua bufro validas dum 7 tagoj.Oni rekomendas prepari laŭbezone.
3.Detekta solvo 2μg/mL
Prenu 48μL de 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP kaj diluu en 11,952μL de 1% BSA por akiri finan koncentriĝon de 2μg/mL detekta solvo.
4.QC kaj Preparado de CHOK1 HCP-Normoj
| Tubo Ne. | Originala | Koncentriĝo | Volumo | 1% BSA | tuta Volumo | Finalo |
| A | Normo | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tablo: Preparado de QC kaj Normoj
Procedo de Prozo
1.Preparu la reakcilojn kiel indikite en "Reaktiva Preparado" supre.
2.Prenu 50μL da normoj, specimenoj kaj QCs (referu al Tabelo 3) en ĉiun puton, tiam aldonu 100μL da Detekta solvo (2μg/mL);Kovru teleron per sigelilo, kaj metu la ELISA-platon sur la termomiksilon.Kovu je 500rpm, 25±3℃ dum 2 horoj.
3.Inversu la mikroplaton en la lavujo kaj forĵetu la tegan solvon.Pipetu 300μL da PBST 0.05% en ĉiun puton por lavi la ELISA-platon kaj forĵeti la solvon, kaj ripetu la lavadon 3 fojojn.Renversi la teleron sur pura papera tuko kaj sekigi.
4.Aldonu 100μL da TMB-substrato (vidu Tabelon 1) al ĉiu puto, sigelu la ELISA-platon kaj kovu en la mallumo je 25±3℃ dum 15 min.
5.Pipetu 100μL da halta solvo en ĉiun puton.
6.Mezuru absorbadon ĉe ondolongo de 450/650nm per mikroplata leganto.
7.Analizu datumojn per SoftMax aŭ ekvivalenta programaro.Grafiku norman kurbon uzante kvar-parametran loĝistikan regresan modelon.
Norma Kurba Ekzemplo
NOTO: Se la koncentriĝo de HCP en la specimeno superas la supran limon de la norma kurbo, ĝi devas esti konvene diluita kun dilua bufro antaŭ testado.
NOTOJ
La halta solvo estas 2M-sulfura acido, bonvolu manipuli zorge por eviti plaŭdon!
