BspQI
BspQI povas esti rekombine esprimita en E. coli kiu povas rekoni specifajn ejojn kaj estas produktitaj sub
BspQI, IIs restrikta endonuclease restrikta endonuclease, estas derivita de rekombina E. coli-trostreĉiĝo kiu portas la klonitan kaj modifitan BspQI-gen de Bacillus sphaericus.Ĝi povas rekoni specifajn ejojn, kaj rekonsekvenco kaj fendiĝlokoj estas kiel sekvas:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produktaj Trajtoj
1. Alta aktiveco, Rapida digesto;
2. Malalta stelo-agado, certigante precizan tranĉadon kiel "skalpelo";
3. Sen BSA kaj bestodevena senpaga;
Metilado-Sentemo
Destas metiligo:Ne sentema;
Dcm metiliĝo:Ne sentema;
CpG-metiligo:Ne sentema;
Kondiĉoj de konservado
La produkto devas esti sendita ≤ 0℃;Konservu ĉe -25 ~ - 15 ℃ kondiĉo.
Stokado bufro
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM ditiotreitolo, 500 µg/ml Rekombina Albumino, 0. 1% Trition X- 100 kaj 50% glicerolo (pH 7.0 @ 25°C).
Unueca Difino
Unu unuo estas difinita kiel la kvanto de enzimo bezonata por digesti 1µg da Interna kontrola DNA en 1 horo je 50 °C en totala reagvolumeno de 50 µL.
Kontrolo de kvalito
Testo pri Proteina Pureco (SDS-PAGE):La pureco de BspQI estis ≥95% determinita per SDS-PAGE-analizo.
RNazo:10U de BspQI kun 1.6μg MS2 RNA dum 4 horoj je 50℃ donas neniun degeneron kiel determinite per agaroza ĝela elektroforezo.
Ne-Specifika DNase-Agado:10U de BspQI kun 1μg λ DNA je 50 ℃ dum 16 horoj, kompare kun 50 ℃ dum 1 horo, donas neniun troan DNA kiel determinite per agarosa ĝela elektroforezo.
Ligado kaj tranĉado:Post digestado de 1 μg λDNA kun 10U BspQI, DNA-fragmentoj povas esti ligitaj kun T4 DNA-ligazo je 16ºC.Kaj ĉi tiuj ligitaj fragmentoj povas esti retranĉitaj per BspQI.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-specifa TaqMan qPCR-detekto montris ke E.coli genarrestaĵo ≤ 0.1pg/ul.
Gastiganta proteinrestaĵo:≤ 50 ppm
Bakteria Endotoksino: LAL-testo, laŭ Ĉina Farmakopeo IV 2020 eldono, ĝela limo-testmetodo, ĝenerala regulo (1143).La enhavo de bakteria endotoksino devas esti ≤10 EU/mg.
Reagsistemo kaj kondiĉoj
| Komponanto | Volumo |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | Ĝis 50 μL |
Reagkondiĉoj: 50 ℃, 1~ 16 h.
Varmiga senaktivigo: 80 °C dum 20 minutoj.
La rekomendinda reagsistemo kaj kondiĉoj povas havigi relative bonan enziman digesta efikon, kiu estas nur por referenco, bonvolu raporti al la eksperimentaj rezultoj por detaloj.
Produkta aplikaĵo
Restrikto endonukleazdigestado, Rapida klonado.
Notoj
1. La volumo de enzimo ≤ 1/10 de la reakcia volumo.
2. Stela aktiveco povas okazi kiam glicerolkoncentriĝo estas pli ol 5%.
3. Fenda aktiveco povas okazi kiam Substrato sub la rekomendita proporcio.
